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紫花牡荆素诱导结肠癌干细胞样细胞凋亡作用的研究

作　者: 黄丽萍
导　师: 曾斌
学　校: 南华大学
专　业:
关键词: 结肠癌结肠癌干细胞样细胞紫花牡荆素细胞凋亡自我更新
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的研究多甲氧基黄酮即紫花牡荆素(casticin，CAS)诱导源自人结肠癌HCT116细胞系肿瘤球形成细胞即结肠癌干细胞样细胞(colon cancer stem cell like cells,CCSLCs)凋亡作用。探讨CAS诱导CCSLCs凋亡是否涉及其降低细胞Akt蛋白磷酸化水平作用。方法体外培养人结肠癌HCT-116细胞，干细胞条件培养基成球培养法分离和富集CCSLCs为受试对象。采用肿瘤球形成法检测不同浓度CAS对CCSLCs自我更新的影响。碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色流式细胞术(flow cytometry, FCM)定量分析CAS对CCSLCs细胞凋亡率的影响。DNA琼脂糖凝胶电泳观察CAS对CCSLCs细胞DNA核小体间断裂的影响。荧光标记CD133抗体FCM分析CAS对CCSLCs干细胞标志物CD133表达的影响。最后，采用Western Blot分析CAS对CCSLCs细胞Akt蛋白磷酸化水平的影响。结果体外培养和扩增人结肠癌HCT116细胞系细胞，采用干细胞条件培养基悬浮培养10天，细胞呈典型非粘附三维结肠癌肿瘤球体生长。肿瘤球形成法检测结果显示，在5.0～10.0μM浓度范围内，CAS以浓度依赖方式减少CCSLCs的肿瘤球数目(P＜0.05)。PI染色FCM分析结果表明CAS(5.0和10.0μM)增加CCSLCs凋亡率，呈浓度依赖趋势(P＜0.05)。CAS(5.0和10.0μM)处理CCSLCs24小时，DNA琼脂糖凝胶电泳呈现核小体间DNA断裂的梯形条带图谱。荧光标记CD133抗体FCM分析结果发现CAS以浓度依赖方式降低干细胞标志蛋白CD133表达(P＜0.05)。Western Blot检测提示CAS抑制CCSLCs细胞Akt蛋白磷酸化，成浓度依赖性(P＜0.05)。结论1. CAS具有抑制CCSLCs自我更新及诱导CCSLCs凋亡作用。2. CAS可能通过抑制细胞Akt蛋白磷酸化进而抑制CCSLCs的肿瘤干细胞特性。

全文目录

目录  3-4
主要缩略词及英文索引  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
论文正文  9-33
  前言  9-11
  材料与方法  11-16
  实验结果  16-22
  讨论  22-26
  结论  26-27
  参考文献  27-33
综述  33-43
  紫花牡荆素药物药理学研究进展  33-39
  参考文献  39-43
攻读硕士期间发表的论文  43-44
致谢  44

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