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人结肠癌相关成纤维细胞对结肠癌LoVo细胞生物学行为的影响

作　者: 林凯金
导　师: 施琳
学　校:
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 结肠癌癌相关成纤维细胞原代培养生物学特性细胞增殖细胞黏附细胞侵袭
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

第一部分人结肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其生物学特性目的探讨人结肠癌相关成纤维细胞（carcinoma-associated fibroblasts，CAFs）及结肠正常成纤维细胞（normal fibroblasts，NFs）的培养和鉴定方法，分析二者在生物学特性和蛋白表达方面的差异。方法采用组织块法和胶原酶消化法进行人结肠CAFs和NFs的原代培养；选择第3代人结肠CAFs及NFs，通过形态学观察和免疫细胞化学染色进行鉴定；CCK-8法检测人结肠CAFs和NFs的增殖活性，并绘制7d生长曲线；ELISA法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中骨桥蛋白（osteopontin，OPN）、TGF-β、VEGF及MMP-2含量。结果结肠CAFs胞质突减少，细胞不规则，排列紊乱，可见双核及多核细胞，除细胞角蛋白（CK）外，波形蛋白（vimentin）与α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）均为阳性表达；与结肠NFs相比，结肠CAFs增殖活性明显增强；ELISA法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中蛋白含量，其中OPN分别为（2.106±0.137）ng/mL和（1.499±0.151）ng/mL（P＜0.01），TGF-β分别为（331.203±12.203）pg/mL和（315.391±12.998）pg/mL（P＜0.01），VEGF分别为（17.216±0.632）pg/mL和（14.887±0.661）pg/mL（P＜0.01），MMP-2分别为（1.830±0.092）ng/mL和（1.436±0.102）ng/mL（P＜0.01）。结论通过组织块法和胶原酶消化法原代培养皆可获得高纯度的人结肠CAFs和NFs；二者在形态结构、增殖活性和蛋白表达等方面差异有统计学意义，这些差异可能是人结肠CAFs发挥其促结肠癌侵袭转移作用的生物学基础。第二部分人结肠癌相关成纤维细胞对结肠癌LoVo细胞生物学行为的影响目的探讨人结肠癌相关成纤维细胞（carcinoma-associated fibroblasts，CAFs）对结肠癌LoVo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭等生物学行为的影响。方法收集人结肠CAFs及正常成纤维细胞（normal fibroblasts，NFs）条件培养基（conditioned medium，CM），建立结肠CAFs、NFs与LoVo细胞间的共培养模型，以无血清培养基处理的LoVo细胞作为空白组，通过细胞增殖、黏附、迁移及Transwell侵袭实验，观察人结肠CAFs对结肠癌LoVo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭等生物学行为的影响。结果LoVo细胞与结肠CAFs共培养后，其增殖48h、72h的吸光度（A）值分别为（0.667±0.059）、（0.709±0.030）；黏附细胞的A值为（0.588±0.067）；12h、24h细胞迁移率分别为（35.2±8.7）%、（64.6±7.1）%；透膜细胞数为（56.2±4.8）个，均高于空白组及NFs组（P<0.05）。结论人结肠CAFs具有增强结肠癌LoVo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭的能力。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
引言  8-9
第一部分人结肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其生物学特性  9-19
  1 材料与方法  9-14
  2 结果  14-15
  3 讨论  15-17
  4 附图表  17-19
第二部分人结肠癌相关成纤维细胞对结肠癌 LoVo 细胞生物学行为的影响  19-30
  1 材料与方法  19-23
  2 结果  23-24
  3 讨论  24-25
  4 附图表  25-30
结论  30
参考文献  30-33
文献综述  33-50
  参考文献  43-50
缩略词表  50-51
攻读学位期间发表文章情况  51-52
个人简历  52-53
致谢  53

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