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干扰素-lambda诱导人食管癌细胞的周期阻滞及其相关分子机制的初步研究

作　者: 霍燕伟
导　师: 齐义新；李全海
学　校: 河北医科大学
专　业: 外科学
关键词: IFN-lambda 细胞周期 PCNA p21 p53
分类号: R735.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


目的:当今世界，癌症仍然是危害人类健康和生命的重大疾病之一。随着现代临床医学的发展，传统治疗手段（比如手术、化疗及放疗）虽然在癌症的治疗上取得重大胜利，但仍存在一定的不足。近年来，生物治疗成就了癌症临床治疗的飞跃性的突破。IFN-lambda是2003年被发现的干扰素家族的新成员，除具有传统的干扰素的抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等作用，它还有无明显骨髓抑制及毒副作用少等优点。但其抗肿瘤增殖作用目前尚无详细机制研究的报道.本实验以初步探讨IFN-lambda抗肿瘤增殖机制为着眼点，旨在通过IFN-lambda无血清培养诱导同期化、流式细胞学检测细胞周期、Western印迹法等，证明IFN-lambda可引起人食管癌细胞的周期阻滞及其相关分子机制的初步研究。结果显示IFN-lambda可诱导细胞周期同步化的TE11和T.Tn细胞在G0/G1期升高，同时可使TE11和YES5细胞周期阻滞在S期；p21表达在IFN-lambda处理的TE11细胞中明显升高，且呈时间依赖效应，而在其他细胞中未见p21的明显改变；在TE11细胞中，IFN-lambda虽然对p53无调节作用，但可下调p53磷酸化表达水平。在IFN-lambda处理的TE11和YES5细胞中PCNA表达下调，而IFN-lambda不能改变TE1和T.Tn细胞中PCNA表达水平；由此说明IFN-lambda可引起人食管癌细胞G0/G1期和S期阻滞，IFN-lambda影响的细胞周期改变与p21，PCNA和磷酸化p53的调节相关。此研究结果将为IFN-lambda成为有效抗击癌症的一种新兴生物治疗手段提供理论依据。方法：本研究采用无血清培养技术诱导细胞周期的同期化，流式细胞术检测细胞的周期，Western印迹检测PCNA,p21, p53分子的表达，初步探讨IFN-lambda抗肿瘤增殖的相关机制。结果：1IFN-lambda诱导人类食管癌细胞周期同步化的情况人食管癌细胞株TE1, YES5, TE11和T.Tn经无血清培养基培养24小时后，各同期化细胞以正常含血清培基继续培养并释放细胞周期，同时各食管癌细胞株分为不加IFN-lambda对照组和加入IFN-lambda处理组，释放细胞周期后的24小时，48小时和72细胞时间点检测细胞周期的分布，TE11, YES5和T.Tn在24小时出现与预期相符的结果。提示：IFN-lambda可诱导细胞周期同步化的食管癌细胞的G0/G1期和S期阻滞，而对不同食管癌细胞株产生不同程度细胞周期改变。2IFN-lambda诱导人类食管癌细胞周期对P21表达情况的影响将以上经IFN-lambda诱导细胞周期同步化后的人类食管癌细胞株TE11,和T.Tn分别用Western blot印迹蛋白分析检测p21在IFN-lambda处理后p21在TE11和T.Tn细胞株中的表达情况，提示：IFN-lambda可以使TE11食管癌细胞株的p21升高；在T.Tn细胞中p21呈表达缺陷。3IFN-lambda与人食管癌细胞中P53磷酸化表达水平的关系本研究中各食管癌细胞株p53基因型分析，只有TE11为p53野生型，故选择TE11作为研究对象，检测IFN-lambda是否可以调节p53及其磷酸化表达。IFN-lambda作用于TE11细胞后，在12小时，24小时，36小时和48小时时间点上，p53的表达在对照组和干扰素处理组间无明显差异，但是p53磷酸化表达水平却在IFN-lambda作用后的36小时和48小时呈显著降低态势。由此可见，IFN-lambda可下调TE11细胞中p53磷酸化表达水平，有可能抑制p53的相关通路。4IFN-lambda处理的TE11和YES5细胞中PCNA表达的情况PCNA为DNA聚合酶δ的相关辅助蛋白，其主要功能是辅助DNA合成，其量的变化与DNA合成的相关变化基本一致，在一定程度上它可以反映细胞增殖状态，但也可以影响DNA合成期（S期）。IFN-lambda处理各食管癌细胞24小时后，在TE1和T.Tn细胞中的对照组和IFN处理组间PCNA表达无明显差异；而在TE11和YES5细胞中IFN-lambda处理组中PCNA表达显著降低。由此可见，IFN-lambda可降低TE11和YES5食管癌细胞株中PCNA的表达。结论：1IFN-lambda可诱导细胞周期同步化的人食管癌细胞的G0/G1期和S期阻滞，而对不同食管癌细胞株产生不同程度细胞周期改变。2IFN-lambda可以使TE11食管癌细胞株的p21升高；在T.Tn细胞中p21呈表达缺陷。3IFN-lambda可下调TE11细胞中p53磷酸化表达水平，有可能抑制p53的相关通路。4、IFN-lambda可降低TE11和YES5食管癌细胞株中PCNA的表达。

全文目录


摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
前言  11
材料与方法  11-17
结果  17-20
附图  20-24
附表  24-27
讨论  27-28
结论  28-29
参考文献  29-31
综述 干扰素-lambda 抗肿瘤机制的研究进展  31-42
  参考文献  38-42
致谢  42-43
个人简历  43

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 食管肿瘤
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