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苏木、鸡血藤及其分别联合顺铂对肺癌细胞增殖、周期的调控作用

作　者: 乔路敏
导　师: 张培彤
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: Lewis肺癌 鸡血藤 苏木 顺铂 血瘀证 细胞增殖 细胞周期
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


近年来,恶性肿瘤已经成为常见病和多发病,肺癌是恶性肿瘤中发病率最高的一种,且死亡率呈逐年上升的趋势。由于发病率和死亡率的攀升,肿瘤的诊治越来越受到重视,中医药在肿瘤的治疗中疗效得到肯定。血瘀证在恶性肿瘤患者中是较多见的,无论是肿瘤患者表现出肿块、疼痛、面色黧黑、肌肤甲错、舌质暗红、有瘀斑瘀点、脉涩等临床症状,还是血液流变学异常、血液凝固异常、微循环障碍等都体现了血瘀与肿瘤密切相关。活血化瘀药在肿瘤的治疗中应用十分广泛,多数学者认为其可以抑制肿瘤的生长,并且在抗肿瘤侵袭和转移方面发挥一定的作用。目的：基于前期的临床和实验研究,本研究采用苏木、鸡血藤及其联合顺铂作用于Lewis肺癌荷瘤小鼠,通过观察它们的抑瘤作用、对细胞周期的影响、对与细胞增殖和细胞周期相关蛋白、基因等表达的改变,探讨苏木、鸡血藤及其联合顺铂抑制肿瘤生长的作用机制,为临床治疗肿瘤时合理应用活血化瘀药提供科学依据。方法：将长势良好处于对数期生长的Lewis肺癌细胞给100只C57BL小鼠接种在腋下,接种后将其随机分为十组,空白组(K)、顺铂组(D)、苏木低剂量组(SL)、苏木高剂量组(SH)、苏木低剂量+顺铂组(SLD)、苏木高剂量+顺铂组(SHD)、鸡血藤低剂量组(JL)、鸡血藤高剂量组(JH)、鸡血藤低剂量+顺铂组(JLD)、鸡血藤高剂量+顺铂组(JHD),自接种24小时后开始给予相应的药物灌胃和腹腔注射,记录成瘤时间,灌胃21天后处死小鼠,取小鼠腋下原位瘤组织,称取重量,按照公式计算抑瘤率；应用流式细胞术检测各组原位瘤组织细胞的细胞周期；应用激光共聚焦显微镜、免疫组化技术检测原位瘤中PCNA. HIF-1a蛋白表达；应用激光共聚焦显微镜检测原位瘤Cyclin D1、CDK4蛋白表达；应用荧光定量PCR法检测原位瘤RB1、CDKN2A基因表达。结果：(1)原位瘤成瘤时间、瘤重及抑瘤率苏木、鸡血藤、顺铂及二者联合顺铂组的成瘤时间较空白组均晚；各用药组瘤重均低于空白组,除苏木低剂量组外(P>0.05),余各组均有统计学意义(P<0.05),中药+顺铂组瘤重低于顺铂组,中药高剂量+顺铂组与顺铂组相比差异有统计学意义(P<0.05)；各组抑瘤率为中药+化疗组>顺铂组>单纯中药组,中药+化疗组的抑瘤率较单纯中药组或单纯化疗组更高,抑瘤作用更明显。(2)原位瘤细胞周期的变化应用流式细胞术检测各组原位瘤的细胞周期,发现除苏木、鸡血藤低剂量组外(P>0.05),其余用药组与空白组相比细胞周期G0/G1期比例均升高(P<0.05),且中药+顺铂组与顺铂组相比G0/G1期比例也升高(P<0.05)。(3)原位瘤PCNA、HIF-1α蛋白表达应用激光共聚焦显微镜、免疫组化法检测原位瘤中PCNA、HIF-1α表达,结果显示各用药组PCNA表达量均低于空白组,除苏木、鸡血藤低剂量外(P>0.05),各组具有统计学意义(P<0.05),中药低剂量+顺铂组PCNA表达量低于顺铂组,但差异无统计学意义(P>0.05),中药高剂量+顺铂组PCNA表达量与顺铂组相比显著降低(P<0.01)；除鸡血藤低剂量组外(P>0.05),其余各用药组HIF-1α的表达量低于空白组(P<0.05),中药+顺铂组HIF-1α表达量较顺铂组有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。(4)原位瘤Cyclin D1、CDK4蛋白表达应用激光共聚焦显微镜检测原位瘤中Cyclin D1、CDK4蛋白表达,结果除苏木低剂量、鸡血藤低剂量外(P>0.05),各组Cyclin D1的表达量均低于空白组(P<0.05)中药+顺铂组Cyclin D1的表达量低于顺铂组,但苏木低剂量+顺铂组与顺铂组相比差异无统计学意义(P>0.05)；单纯苏木、鸡血藤组CDK4的表达量与空白组相比无明显差异(P>0.05),顺铂组、中药+顺铂组CDK4的表达量较空白组降低(P<0.05),中药低剂量+顺铂组CDK4的表达量与顺铂组相比无明显差异(P>0.05),中药高剂量+顺铂组CDK4的表达量较顺铂组降低(P<0.05)(5)原位瘤RB1、CDKN2A基因的表达应用荧光定量PCR法检测原位瘤中RB1、CDKN2A基因mRNA表达,结果提示各用药组RB1基因mRNA表达较空白组均升高,但苏木、鸡血藤低剂量组与空白组相比无统计学意义(P>0.05),中药+顺铂组与顺铂组相比RB1基因mRNA表达量升高(P<0.05)；各组CDKN2A基因mRNA的表达量较空白组升高,但单纯苏木组、鸡血藤低剂量组与空白组相比无统计学意义(P>0.05),中药+顺铂组与顺铂组相比CDKN2A基因mRNA表达量升高,但只有鸡血藤高剂量+顺铂组与顺铂相比有统计学意义(P<0.05)。结论：苏木、鸡血藤及二者联合顺铂可以抑制小鼠Lewis肺癌的生长、增殖,并且与药物的浓度有一定相关性,其作用机制主要是对细胞周期有影响,将其阻滞于G0/G1期,并且可以抑制与细胞增殖相关的蛋白PCNA、HIF-1α表达,还对P16-Cyclin D1-CDK4-RB途径具有调节作用,通过以上各环节共同对肿瘤细胞的增殖起到抑制作用,从而阻滞肿瘤的发生发展。

全文目录


中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
英文缩略词表  10-11
第一部分 文献综述  11-23
  文献综述一：细胞增殖、周期相关蛋白与肿瘤  11-17
    1 细胞增殖核抗原  11-12
    2 细胞周期蛋白(Cyclins)  12-14
    3 周期素依赖性激酶(CDKs)  14
    4 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKIs)  14-15
    5 总结  15-17
  文献综述二：血瘀证与恶性肿瘤的关系、及活血化瘀法在肿瘤中的应用  17-23
    1 恶性肿瘤中的血瘀证  17-18
    2 活血化瘀法在恶性肿瘤中的作用  18-19
    3 活血化瘀药物的应用  19-20
    4 小结  20-23
第二部分 正文  23-73
  前言  23-25
  第一章 苏木、鸡血藤以及二者分别联合顺铂对Lewis肺癌小鼠抑瘤率的研究  25-33
    1 实验目的  25
    2 实验材料  25-26
    3 实验方法  26-27
    4 统计方法  27
    5 结果  27-30
    6 讨论  30-33
  第二章 苏木、鸡血藤以及二者分别联合顺铂对Lewis肺癌细胞周期的影响  33-41
    1 实验目的  33
    2 实验材料  33
    3 实验方法  33-34
    4 统计方法  34
    5 结果  34-38
    6 讨论  38-41
  第三章 苏木、鸡血藤以及二者分别联合顺铂对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织PCNA、HIF-1α表达的影响  41-53
    1 实验目的  41
    2 实验材料  41-42
    3 实验方法  42-43
    4 统计方法  43
    5 结果  43-50
    6 讨论  50-53
  第四章 苏木、鸡血藤以及二者分别联合顺铂对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织Cyclin D1、CDK4蛋白表达的影响  53-63
    1 实验目的  53
    2 实验材料  53
    3 实验方法  53-54
    4 统计方法  54
    5 结果  54-61
    6 讨论  61-63
  第五章 苏木、鸡血藤以及二者分别联合顺铂对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织Rb1、CDKN2A基因表达的影响  63-73
    1 实验目的  63
    2 实验材料  63-64
    3 实验方法  64-68
    4 统计方法  68
    5 结果  68-70
    6 讨论  70-73
结语  73-75
参考文献  75-83
致谢  83-85
个人简历  85

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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