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Cdc42结合γCOP上调EGFR的蛋白水平并促进其核转移和细胞恶性转化

作　者: 汪晓玉
导　师: 辛洪波
学　校:
专　业: 药物分析学
关键词: Cdc42 表皮生长因子受体（EGFR） Src基因参与的逆行运输 γCOP
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

Cdc42是一个和致癌基因Ras相关的GTP结合蛋白，可以进行有活性的GTP结合状态和无活性的GDP结合状态的循环，作为一个分子开关在胞内信号转导通路中发挥桥梁作用。在细胞骨架的重组、细胞形态的形成、细胞极性以及细胞迁移等方面有重要的作用，可参与正常细胞增殖、分化、凋亡的调节，并与肿瘤的发生、侵袭和转移密切相关。Cdc42可以被各种细胞外刺激激活，例如表皮生长因子（EGF）。目前，已有研究表明Cdc42的突变体Cdc42(F28L)能够进行自发的GDP-GTP交换（称为快速循环），并使小鼠胚胎成纤维细胞（NIH3T3）发生恶性转化，但其分子机制并不清楚。为了进一步研究Cdc42导致细胞发生恶性转化的分子机制，本研究将Cdc42(F28L)的C端区域的两个赖氨酸突变为丝氨酸，得到Cdc42(F28Lss)突变体。该突变能够消除Cdc42和外被体蛋白γCOP的结合。我们发现，稳定表达Cdc42(F28Lss)的细胞比稳定表达Cdc42(F28L)的细胞的生长速度慢，但是这两个突变体具有相似的亚细胞定位，并都能够产生伪足。而Cdc42(F28Lss)突变体不能像Cdc42(F28L)突变体那样引起EGFR在胞内累积，相应地，也不能诱导ERK,JNK和PI-3K的激活。此外，研究发现，Cdc42(F28L)能够引起Src基因高表达，并导致EGFR进入细胞核的量增加，这促进了细胞增殖和恶性转化，而Cdc42(F28Lss)却不能引起这些现象的发生。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-8
第1章绪论  8-14
  1.1 Cdc42 的研究进展和意义  8-14
    1.1.1 引言  8
    1.1.2 Cdc42 的生物学功能  8-11
    1.1.3 Cdc42 和 EGFR 之间的相互作用关系  11-14
第2章 Cdc42 的突变体 Cdc42(F28Lss)对细胞增殖和细胞形态的影响  14-27
  2.1 引言  14
  2.2 材料和方法  14-23
    2.2.1 亚克隆  14-17
    2.2.2 基因定点突变  17-19
    2.2.3 稳定细胞系的建立及细胞培养  19-20
    2.2.4 蛋白质印迹  20-21
    2.2.5 饱和密度实验  21-22
    2.2.6 免疫荧光实验  22-23
  2.3 结果  23-25
    2.3.1 突变体 Cdc42(F28Lss)不能够引起细胞的恶性转化  23-24
    2.3.2 稳定表达 Cdc42(F28Lss)和 Cdc42(F28L)的细胞形态相似  24
    2.3.3 Cdc42(F28Lss)和 Cdc42(F28L)的亚细胞定位相同  24-25
  2.4 讨论  25-27
第3章探究 Cdc42 的突变体 Cdc42(F28Lss)不引起细胞发生恶性转化的分子机制  27-38
  3.1 引言  27
  3.2 材料和方法  27-29
    3.2.1 EGFR 时间点实验  27-28
    3.2.2 检测 Cdc42(F28Lss)对 EGF 刺激 ERK、JNK、PI3K 的影响  28
    3.2.3 DNA 增殖实验（BrdU）  28
    3.2.4 检测 Cdc42(F28Lss)对细胞核内 EGFR 表达的影响  28-29
    3.2.5 检测 Cdc42(F28Lss)对 Src 基因表达的影响  29
  3.3 结果  29-36
    3.3.1 EGFR 不能在稳定表达 Cdc42(F28Lss)的细胞中累积  29-30
    3.3.2 Cdc42(F28Lss)不能激活 ERK, JNK 和 PI-3K  30-32
    3.3.3 Cdc42(F28Lss)阻止细胞周期进程  32-33
    3.3.4 Cdc42(F28L)可促进 EGFR 进入细胞核内，而 Cdc42(F28Lss)不能  33-35
    3.3.5 Cdc42(F28Lss)降低 Src 基因的表达  35-36
  3.4 讨论  36-38
    3.4.1 分析γCOP 和 Cdc42 的结合对 EGFR 逆行转运的影响  36
    3.4.2 探讨 Cdc42 影响细胞恶性转化的新的分子机制  36-38
第4章结论  38-39
致谢  39-40
参考文献  40-43
附录  43-45
综述  45-50
  参考文献  49-50

Cdc42结合γCOP上调EGFR的蛋白水平并促进其核转移和细胞恶性转化

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