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类BRC8肽的合成及其与p53(117-142)的相互作用

作 者: 张雅峥
导 师: 马丽
学 校: 河南工业大学
专 业: 有机化学
关键词: 类BRC肽 靶肽p53 固相合成 光谱法 相互作用
分类号: R73-36
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要


癌症对人类健康造成了严重的危害,癌症的生成涉及多种基因及其产物的变化,其中p53、RAD51为研究较为广泛的抑癌基因,他们在行使功能时需要乳腺癌易感基因2(BRCA2)的调控。BRCA2是一种重要的抑癌基因,与其他肿瘤的发生也有广泛的相关性,重复基元BRC为BRCA2的重要功能区,参与了多种癌变过程,多数乳腺癌患者体内伴随着BRC重复基元的突变,将BRC保守残基保留即可得重复基元的保守序列,在已知的保守序列基础上对重复基元BRC进行结构改造,对研究癌症的治疗药物提供新的前体分子具有重要意义。本文根据BRC8的结构特点,将BRC8肽中侧链带有芳环的Phe替换成为Gly,Ser替换成为Cys,设计出了两条类BRC8肽: NSSAFSGFCTASGKQVSILESCLHKVKGVLEEFDL和NSSAGSGFCTASGKQVSILESCLHKVKGVLEEGDL,利用固相合成法和片段连接法相结合的方式合成了以上两条类BRC8肽与靶肽p53:GTAKSVTCTYSPALNKMFCQLAKTCP,利用片段缩合法合成了BRC8肽NSSAFSGFSTASGKQVSILESSLHKVKGVLEEFDL,利用RP-HPLC对以上四条目标肽进行了分离纯化,纯度均达到95%以上。利用ESI-MS对上述目标肽进行了表征。利用紫外光谱法、荧光光谱法和圆二色谱法研究了BRC8以及两条类BRC肽与靶肽p53的相互作用。随着BRC8肽及类BRC8肽NSSAFSGFCTASGKQVSILESCLHKVKGVLEEFDL浓度的增加,靶肽p53的紫外光谱均呈现增色效应,而另一类BRC8肽NSSAGSGFCTASGKQVSILESCLHKVKGVLEEGDL浓度的增大,靶肽p53的紫外光谱则呈减色效应。荧光光谱结果表明,BRC8和NSSAFSGFCTASGKQVSILESCLHKVKGVLEEFDL与p53随着浓度的增加荧光强度先减小后增大。NSSAGSGFCTASGKQVSILESCLHKVKGVLEEGDL与p53随着浓度的增加荧光强度先增大后减小。替换掉两个Phe得到的类BRC肽与p53相互作用后的紫外、荧光光谱与BRC8与p53作用后的光谱明显不同,表明Phe为BRC8中的关键位点。圆二色谱法表明p53的β折叠含量为17%,BRC8、替换掉两个F,两个S的类BRC肽、替换掉两个S的类BRC肽与p53相互作用后与p53相互作用后,p53的β折叠含量分别增大到20%、26%、22%。

全文目录


摘要  6-8
Abstract  8-13
第一章 前言  13-25
  1.1 BRCA2 活性肽  13-14
    1.1.1 BRCA2 结构特征  13-14
    1.1.2 类 BRC 肽的设计  14
  1.2 靶肽 p53  14-16
    1.2.1 p53 基因特点  14-15
    1.2.2 p53 的功能  15
    1.2.3 p53 的灭活机制  15-16
  1.3 靶肽 RAD51  16
    1.3.1 RAD51 基因特点  16
  1.4 多肽的合成  16-19
    1.4.1 多肽的固相合成法  16-17
    1.4.2 保护基及切割剂的选择  17-18
    1.4.3 片段连接法  18-19
    1.4.4 片段缩合法  19
  1.5 多肽的分离纯化及分析方法  19-21
    1.5.1 多肽的分离纯化方法  19-20
      1.5.1.1 反相高效液相色谱法(RP-HPLC)  19-20
      1.5.1.2 薄层色谱法(TLC)  20
      1.5.1.3 凝胶过滤层析法(GFC)  20
      1.5.1.4 高效毛细管电泳法(HPCE)  20
    1.5.2 多肽的分析  20-21
      1.5.2.1 质谱法(MS)  20-21
      1.5.2.2 核磁共振法(NMR)  21
  1.6 类 BRC 肽与靶肽及其他生物大分子相互作用的主要研究方法  21-23
    1.6.1 紫外可见吸收光谱法  21-22
    1.6.2 荧光光谱法  22-23
    1.6.3 圆二色谱法  23
  1.7 本课题的选题意义及主要内容  23-25
第二章 靶肽 p53 与类 BRC8 肽的合成  25-35
  2.1 实验部分  25-30
    2.1.1 仪器与试剂  25-26
      2.1.1.1 仪器  25-26
      2.1.1.2 试剂  26
    2.1.2 实验步骤  26-30
      2.1.2.1 靶肽 GTAKSVTCTYSPALNKMFCQLAKTCP 的合成  26-28
      2.1.2.2 母肽 NSSAFSGFSTASGKQVSILESSLHKVKGVLEEFDL 的合成  28
      2.1.2.3 目标肽的色谱分析条件  28-29
      2.1.2.4 目标肽的质谱分析条件  29-30
      2.1.2.5 目标肽的制备条件分析  30
  2.2 结果与讨论  30-34
    2.2.1 GTAKSVTCTYSPALNKMFCQLAKTCP 的 RP-HPLC 分析及质谱表征  30-31
    2.2.2 NSSAFSGFSTASGKQVSILESSLHKVKGVLEEFDL 的 RP-HPLC 分析及质谱表征  31-32
    2.2.3 NSSAFSGFCTASGKQVSILESCLHKVKGVLEEFDL 的 RP-HPLC 分析及质谱表征  32-33
    2.2.4 NSSAGSGFCTASGKQVSILESCLHKVKGVLEEGDL 的 RP-HPLC 分析及质谱表征  33-34
  2.3 本章小结  34-35
第三章 类 BRC8 肽与靶肽 p53(117-142)相互作用研究  35-46
  3.1 实验材料与方法  35-37
    3.1.1 仪器与试剂  35
      3.1.1.1 仪器  35
      3.1.1.2 试剂  35
    3.1.2 实验方法  35-37
      3.1.2.1 溶液的配制  35-36
      3.1.2.2 紫外光谱法研究 BRC 肽及类 BRC 肽与靶肽 p53(117-142)的相互作用  36
      3.1.2.3 荧光光谱法研究 BRC 肽及类 BRC 肽与靶肽 p53(117-142)的相互作用  36-37
      3.1.2.4 圆二色谱法研究 BRC 肽及类 BRC 肽与靶肽 p53(117-142)的相互作用  37
  3.2 结果与讨论  37-44
    3.2.1 紫外光谱法研究 BRC8 肽及类 BRC 肽与靶肽 p53 的相互作用  37-41
      3.2.1.1 紫外光谱法研究 BRC8 肽与靶肽 p53 相互作用  37-38
      3.2.1.2 紫外光谱法研究类 BRC 肽 NSSAGSGFCTASGKQVSILESCLHKVK GVLEEGDL 与靶肽 p53 相互作用  38-39
      3.2.1.3 紫外光谱法研究类 BRC 肽 NSSAFSGFCTASGKQVSILESCLHKVK GVLEEFDL 与靶肽 p53 相互作用  39-41
    3.2.2 荧光光谱法研究 BRC8 肽及类 BRC 肽与靶肽 p53 的相互作用  41-43
      3.2.2.1 荧光光谱法研究 BRC8 肽与靶肽 p53 相互作用  41
      3.2.2.2 荧光光谱法研究类 BRC 肽 NSSAGSGFCTASGKQVSILESCLHK VKGVLEEGDL 与靶肽 p53 相互作用  41-42
      3.2.2.3 荧光光谱法研究类 BRC 肽 NSSAFSGFCTASGKQVSILESCLHKVK GVLEEFDL 与靶肽 p53 相互作用  42-43
    3.2.3 CD 光谱法研究 BRC8 肽及类 BRC 肽与靶肽 p53 的相互作用  43-44
  3.3 本章小结  44-46
结论  46-47
参考文献  47-55
致谢  55-56
个人简历  56

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 肿瘤学实验研究 > 治疗实验
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