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一株鲨鱼鳃部真菌中具有抗肿瘤及相关生物活性化合物的研究
作 者: 韩金媛
导 师: 张翼
学 校: 大连交通大学
专 业: 环境科学
关键词: 海洋真菌 次生代谢产物 抗肿瘤活性 抗卤虫活性 DNA损伤修复实验
分类号: R73-361
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
癌症是对人类威胁最大的疾病之一,抗肿瘤药物的筛选已成为药物筛选的热点。由于海洋微生物的物种多样性,其产生的活性物质种类丰富、结构多样,作为抗癌药物的新药源,具有巨大的开发潜力,已经成为海洋药物研究的焦点。本文对分离自鲨鱼鳃部的24株活性真菌进行了不同培养基中的液体静置发酵,对得到的提取物进行了DNA损伤修复实验、抗卤虫活性测试及抗肿瘤活性测试,对其中活性较强的提取物进行了薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)分析。筛选出来自3株真菌具有较强抗虫、抗菌、抗肿瘤活性且主要成分差异较大的提取物BP2-BP2T1AP2-AP2T1和BG2-TBG2-2,对其进行了活性成分的追踪及化学显色研究,推测它们可能含有吲哚衍生物、其他生物碱、酚类及萜类等活性成分。对筛选得到的提取物进行HPLC-DDRT、卤虫活性-TLC跟踪,选择出一株成分丰富且具有较强生物活性的理想菌株TBG2-2,其BG2培养基发酵提取物的卤虫致死率高达百分之百并具有很强抗大肠杆菌活性。对该菌株进行了20升规模的静置发酵培养,在抗卤虫、抗大肠杆菌活性测试引导下,利用硅胶柱、反相柱、凝胶柱层析及半制备高效液相色谱制备的方法,对其有机溶剂提取物经粗分离得到的10个活性组分进行了分离纯化,最终得到了6个化合物。通过核磁共振、质谱等波谱分析及文献数据比对,其中3个化合物的结构得到了鉴定,分别为已知抗肿瘤活性化合物fructigenines A、 viridicatol和cyclopenol。这些活性化合物可以用作进一步的研究与开发。该菌株中的新结构活性化合物还有待深入细致的研究。本研究表明鲨鱼鳃部真菌的次生代谢产物在杀虫剂的研发、抗生素的来源及抗肿瘤药物的开发方面可能具有一定的应用价值。
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全文目录
摘要 5-6 Abstract 6-8 目录 8-10 第一章 文献综述 10-21 1.1 海洋微生物的多样性 10-13 1.1.1 物种多样性 10-11 1.1.2 遗传多样性 11 1.1.3 生态系统多样性 11-12 1.1.4 代谢产物化学结构的多样性 12 1.1.5 生物活性的多样性 12-13 1.2 海洋微生物抗肿瘤活性物质的发展现状及成果 13-19 1.2.1 海洋放线菌中的抗肿瘤活性物质 14-15 1.2.2 海洋真菌中的抗肿瘤活性物质 15-17 1.2.3 海洋细菌中的抗肿瘤活性物质 17-19 1.2.4 海洋微藻中的抗肿瘤活性物质 19 1.3 本论文研究内容 19-21 第二章 鲨鱼鳃部真菌抗生活性-化学筛选 21-36 2.1 材料与方法 21-24 2.1.1 菌种与培养基 21-22 2.1.2 DNA损伤修复模型实验(DDRT) 22 2.1.3 卤虫模型实验 22 2.1.4 抗肿瘤活性测试 22-23 2.1.5 薄层色谱(TLC)法 23 2.1.6 高效液相色谱分析 23 2.1.7 抗大肠杆菌活性成分的生物自显影 23 2.1.8 TLC板条带卤虫毒测试 23-24 2.1.9 菌株活性成分性质初步判定(化学显色) 24 2.2 结果与讨论 24-35 2.2.1 24株真菌的发酵提取 24-25 2.2.2 提取物活性筛选 25-27 2.2.3 菌株谱图分析 27-30 2.2.4 活性菌株提取物活性成分追踪 30-33 2.2.5 活性菌株提取物活性成分性质初步研究 33-35 2.3 本章小结 35-36 第三章 提取物活性物质追踪 36-40 3.1 高效液相色谱(HPLC)-活性测试-薄层色谱(TLC)偶联方法 36 3.2 结果与讨论 36-39 3.2.1 高效液相色谱法追踪活性物质 36-38 3.2.2 TLC法追踪活性物质 38-39 3.3 本章小结 39-40 第四章 菌株TBG2-2的发酵与分离纯化 40-57 4.1 材料与方法 40-42 4.1.1 菌株TBG2-2的发酵 40 4.1.2 菌株TBG2-2中化合物的提取 40 4.1.3 BG2-TBG2-2中化合物的分离与纯化 40-42 4.2 结果与讨论 42-48 4.2.1 菌株TBG2-2的发酵与化合物的提取 42-43 4.2.2 粗提物BG2-TBG2-2的分离与纯化 43-48 4.3 化合物的鉴定 48-56 4.3.1 化合物1的鉴定 48-52 4.3.2 化合物2的鉴定 52-54 4.3.3 化合物3的鉴定 54-56 4.4 本章小结 56-57 结论 57-58 参考文献 58-63 攻读硕士学位期间发表的学术论文 63-64 致谢 64-65 附录 65-67
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