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铝和ApoE ε4联合作用对SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化和Aβ表达的影响

作 者: 王昊
导 师: 牛侨
学 校: 山西医科大学
专 业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词:  ApoE SH-SY5Y细胞 磷酸化tau蛋白 
分类号: R749.16
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 9次
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内容摘要


目的采用SH-SY5Y细胞研究环境因素和遗传因素ApoE S4基因分别及联合作用的情况下,对tau蛋白不同位点磷酸化水平和表达的影响,探讨铝和ApoEε4是否存在交互作用。方法培养并选取SH-SY5Y细胞,分别进行AICl3染毒和ApoE ε4转染处理,实验分组包括空白对照组、200μM AlCl3的低剂量组、400μM AlCl3的中剂量组、800μM AlCl3的高剂量组、空质粒组、ApoE ε4组、400μM AlCl3+ApoEε4组。AICl3染毒或ApoE ε4转染48h后,采用CCK-8试剂盒测定细胞活力;采用ELISA试剂盒测定总tau蛋白、tau-181、tau-231、au-262、tau-396和Aβ-40含量;采用析因设计的方法分析AICl3和ApoE s4是否存在交互作用。结果1.随着AlCl3染毒剂量的增高,SH-SY5Y细胞数量逐渐减少,突触变短消失;CCK-8检测结果显示细胞活力逐渐下降,200μM AlCl3的低剂量组、400μM AlCl3的中剂量组、800μM AICl3的高剂量组活力显著低于空白对照组(P<0.05); ELISA检测结果显示,200μM AlCl3的低剂量组、400μM AlCl3的中剂量组、800μM AlCl3的高剂量组相较于空白对照组,总tau蛋白、tau-181、tau-231、tau-262、tau-396和Aβ-40含量均有显著升高(P<0.05)。2.经ApoE ε4转染后,SH-SY5Y细胞形态趋于圆形,易崩解死亡;CCK-8检测结果显示细胞活力明显下降,并显著低于空白对照组(P<0.05); ELISA检测结果显示,ApoE ε4组细胞的tau蛋白和Aβ-40含量均显著高于空白对照组(P<0.05)。3.经AICl3和ApoE ε4独立和联合染毒后可观察到,两种因素联合作用下细胞丧失固有形态,其数量较空白对照和两因素独立作用时更为稀少;CCK-8检测结果显示细胞活力低下,与空白对照组有显著差异(P<0.05); ELISA检测结果显示,ApoE s4组细胞的总tau蛋白、tau-181、tau-231、tau-262、tau-396和Aβ-40含量均显著高于空白对照组(P<0.05);根据以上结果经析因设计分析得出AlC13和ApoE ε4存在明显的交互作用(P<0.05),并表现为协同效应。结论1.铝和ApoE ε4基因均可导致SH-SY5Y细胞形态改变,降低细胞活力,具有明显的细胞毒性作用;2.铝和ApoE ε4基因均促使总tau、tau-181、tau-231、tau-262和tau-396磷酸化水平升高,Ap沉积增多;3.铝和ApoE ε4基因同时存在的情况下两种因素具有交互作用,且表现为协同效应。

全文目录


中文摘要  5-7
Abstract  7-9
英文缩写  9-10
前言  10-15
  参考文献  13-15
第一部分 SH-SY5Y细胞tau蛋白和的影响  15-29
  1 材料与方法  15-18
  2 结果  18-24
  3 讨论  24-27
  参考文献  27-29
第二部分 ApoE ε4对SH-SY5Y细胞tau蛋白和Aβ的影响  29-44
  1 材料与方法  29-33
  2 结果  33-40
  3 讨论  40-42
  参考文献  42-44
第三部分 铝和ApoE ε4联合作用对SH-SY5Y细胞tau蛋白和Aβ的影响  44-58
  1 材料与方法  44-45
  2 结果  45-55
  3 讨论  55-57
  参考文献  57-58
小结  58-59
综述  59-67
  参考文献  63-67
致谢  67-68
个人简历  68

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 精神病学 > 脑器质性精神障碍 > 老年及早老性精神障碍
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