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丰富环境干预对SAMP8小鼠认知功能及海马神经元的影响

作　者: 赵燕
导　师: 陈海英
学　校: 河北医科大学
专　业: 护理学
关键词: 丰富环境社会交往（群居或者独居） SAMP8小鼠认知功能海马神经元 CA1区 NMDAR1
分类号: R749.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

目的：随着我国人口老龄化进程的不断加快，生育率的下降和人均期望寿命的进一步升高，空巢独居现象日趋突出，已成为我国老龄化进程中不容忽视的重要问题之一。本实验对SAMP8小鼠进行丰富环境的干预，观察小鼠认知功能的改善情况，并观察了解社会交往（群居或者独居）对SAMP8小鼠的影响，同时应用光镜及透射电镜观察分析丰富环境与普通环境对SAMP8小鼠海马神经元的影响。以此论证丰富环境及社会交往对老年痴呆患者护理措施的可靠性和作用机制，为老年痴呆症患者的早期干预及早期预防提供科学客观的依据。方法：选用健康雄性6月龄快速老化SAMP8小鼠32只，随机分为丰富环境＋群居组（A）、丰富环境＋独居组（B）、普通环境＋群居组（C）和普通环境＋独居组（D）。其他如饲养温度、光照、饮水、饮食等条件和环境相同。总干预时间为6周。1.Morris水迷宫试验：环境干预结束后，小鼠在水迷宫实验室环境下饲养2d。每天上午8:00～12:00间进行水迷宫实验训练。定位航行试验：将Morris水迷宫圆形水池平均分为4个象限，其中1个象限中放入一平台。小鼠自每个象限中点面向池壁入水，视频采集系统跟踪并记录小鼠找到平台所需的时间(逃避潜伏期:s)。每天每只小鼠在4个象限依次训练1次，训练共进行5d。空间探索试验：训练结束后撤掉水下平台，小鼠自距平台最远的入水点面向池壁入水，观察小鼠的游泳轨迹并记录小鼠120s内跨越原平台位置的次数。2.组织切片制备及观察：每组取4只小鼠，开胸暴露心脏后，将输液针刺入左心室，同时剪开右心耳，用0.9%生理盐水快速冲洗，冲净小鼠体内血液后用4%多聚甲醛灌注，然后进行多聚甲醛后固定。自上丘至视交叉节段取脑组织，制备四套石蜡切片，分别用于HE染色，尼氏染色，抗NMDAR1免疫组化染色和阴性对照。3.海马CA1区神经元超微结构观察：灌注取脑后迅速游离海马，4%预冷的戊二醛溶液固定，切片，厚约1mm；1h后再次切成<1mm3的海马CA1区组织块，锇酸固定，脱水，树脂包埋，LKB-5超薄切片机切片，厚度50nm。醋酸铀－柠檬酸铅染色，透射电镜观察CA1区神经元及其内超微结构的变化。结果：1.Morris水迷宫实验结果：定位航行实验中，随训练天数增加，各组潜伏期均有缩短；丰富环境群居组潜伏期明显短于其他各组（P<0.05），空间探索试验中跨越平台次数最多（P<0.05）。丰富环境、群居能改善学习认知功能，与普通环境、独居组比较差异有统计学意义（P<0.05）。2.HE染色结果：相比其他三组，普通环境独居组海马CA1区神经元病理性改变最严重，呈现弥漫性空泡变性，细胞肿胀，核深染、固缩现象。而丰富环境群居组神经元结构较其余各组正常，细胞层数多，神经元排列相对紧密整齐，层次清楚。3.尼氏染色结果：丰富环境群居组海马神经元形态规则，排列整齐且密集，胞浆中尼氏体丰富致密，细胞数较多，与其它各组相比有统计学意义(P<0.05)；丰富环境独居组海马神经元体积较小，尼氏体较稀疏。普通环境独居组海马神经元排列稀疏、紊乱，丢失严重，细胞核浓密深染、固缩现象明显，胞浆内尼氏体减少，细胞数与丰富环境独居组的细胞数相比明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)。普通环境群居组的尼氏体较普通环境独居组增多，细胞数增加，差异有统计学意义(P<0.05)。4.抗NMDAR1免疫组化染色结果：普通环境独居组免疫反应产物表达最少，细胞排列松散，染色最淡；丰富环境群居组可见NMDAR1蛋白免疫反应产物表达较多，细胞排列紧密，染色较深。光密度值分析显示丰富环境群居组光密度值最高，普通环境独居组光密度值最低。5.电镜观察海马CA1区神经元超微结构结果：电镜观察丰富环境群居组神经元核膜完整光滑，核内染色质均匀，电子密度低。丰富环境独居组神经元核型不规则，细胞器容量较少，有脂褐素的沉积。普通环境群居组神经元核周隙轻度扩张，核质轻度浓缩，有少量脂褐素沉积。普通环境独居组神经元核周隙扩张，核膜局部消失融散，胞质肿胀发白，形成不规则的高电子密度团块；脂褐素沉积，细胞器明显减少。结论：1.丰富环境、群居（增加社会交往）能够改善SAMP8小鼠的学习记忆及认知功能。2.丰富环境、群居（增加社会交往）能改善SAMP8小鼠海马神经元的病理性损伤，减轻尼氏体、神经元及其细胞器的变性和丢失。3.丰富环境、群居（增加社会交往）能够增加SAMP8小鼠海马CA1区NMDAR1的蛋白含量。4.丰富环境和群居（增加社会交往）对SAMP8小鼠的海马神经元及其认知功能具有独立性保护作用，二者无交互作用。

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摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
英文缩写  11-12
前言  12-14
材料与方法  14-19
结果  19-23
附图  23-31
附表  31-33
讨论  33-37
结论  37-38
参考文献  38-41
综述丰富环境对阿尔茨海默病脑功能康复的影响  41-49
  参考文献  46-49
致谢  49-50
个人简历  50

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