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ER-α36在PC12细胞血清营养剥夺耐受性中的作用初探

作　者: 马依妮
导　师: 邹伟
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: ER-α36 中枢神经系统 雌激素 血清
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 2次
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内容摘要


研究表明,雌激素参与缺血性脑卒中的神经保护作用。雌激素主要与雌激素受体结合,通过基因组模式或非基因组模式发挥生物学效应。新近发现的ER-a36是ER-a一个亚型,它广泛表达在乳腺、卵巢、肝、骨等细胞和组织中,并可介导膜起始的雌激素信号通路。本室前期研究发现,ER-a36也广泛表达在脑内多个区域,但作用尚不明确。本实验利用RNA干扰技术建立的ER-a36基因敲低细胞系,通过免疫细胞化学、免疫细胞荧光、MTT、Hoechst染色、荧光素酶分析、Western blot等方法,探讨了ER-α36在PC12细胞血清营养剥夺耐受性中的作用,为临床预防和治疗缺血性脑卒中提供实验依据。结果：1.原代培养不同时间的皮层和海马神经元中均有ER-α36表达,且主要分布在胞浆和胞膜上,并与Caveolin-1共定位。原代培养的皮层神经元和海马神经元纯度较高,NSE免疫阳性率均达到97%。2.PC12细胞对血清营养剥夺的耐受具有明显的时间和血清浓度依赖性。细胞在含2.5%血清的无酚红培养基中生长速度减慢,其存活率与正常培养PC12细胞相比显著降低,以此可建立血清营养剥夺细胞模型；此外,细胞在血清剥夺(0.5%血清)2h时,不会发生凋亡。3.敲低ER-a36,降低了细胞对低浓度E2的敏感性,增强了细胞血清营养剥夺的耐受性。其中,pM和nM级别的E2对PC12细胞促增殖作用减弱；PC12细胞血清营养剥夺4h开始凋亡,敲低ER-a36后细胞血清营养剥夺8h开始凋亡。4. ER-a36介导E2激活的MAPK信号通路影响PC12细胞的营养剥夺(低血清)耐受性。在PC12细胞中转染ER-a36表达质粒后再分别用不同浓度E2处理,与未用E2处理组相比,低浓度E2增强荧光素酶活性,10pM最为显著。ER-α36参与血清营养剥夺的细胞增殖和存活通路,并介导E2激活的MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的交叉对话,同时介导低浓度E2激活的MAPK信号通路。结论：敲低ER-a36降低PC12细胞对低浓度E2的敏感性、增强细胞血清营养剥夺的耐受性；ER-a36参与E2激活的增殖信号通路影响PC12细胞血清营养剥夺(低血清)耐受性。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-7
目录  7-9
引言  9-10
1 文献综述  10-16
  1.1 雌激素在脑内的合成分泌  10-11
  1.2 雌激素受体依赖与非依赖的作用方式  11-13
    1.2.1 雌激素受体依赖的作用方式  11-13
    1.2.2 雌激素受体非依赖的作用方式  13
  1.3 雌激素在不同中枢神经系统疾病中的作用  13-15
    1.3.1 雌激素与阿尔茨海默氏病  13-14
    1.3.2 雌激素与帕金森氏病  14
    1.3.3 雌激素与缺血性脑卒中  14-15
  1.4 展望  15-16
2 ER-α36在原代培养的大鼠皮层、海马神经元不同发育时期的表达及胞内分布  16-26
  2.1 前言  16
  2.2 材料与方法  16-19
    2.2.1 材料、试剂与仪器  16-18
    2.2.2 实验方法  18-19
  2.3 实验结果  19-23
    2.3.1 原代培养的大鼠皮层神经元和海马神经元的鉴定  19-20
    2.3.2 ER-α36在原代培养的大鼠皮层神经元不同发育时期的表达及胞内分布  20-22
    2.3.3 ER-α36在原代培养的大鼠海马神经元不同发育时期的表达及胞内分布  22-23
  2.4 讨论  23-25
  2.5 小结  25-26
3 血清营养剥夺(低血清)细胞模型的建立及其对低血清的耐受特征  26-33
  3.1 前言  26
  3.2 材料与方法  26-28
    3.2.1 材料、试剂与仪器  26-27
    3.2.2 实验方法  27-28
  3.3 实验结果  28-31
    3.3.1 血清营养剥夺PC12细胞模型的建立  28-30
    3.3.2 血清营养剥夺PC12细胞对低血清的耐受特征  30-31
  3.4 讨论  31-32
  3.5 小结  32-33
4 ER-α36敲低对细胞的低浓度E_2敏感性和血清剥夺耐受性的影响  33-40
  4.1 前言  33
  4.2 材料与方法  33-34
    4.2.1 材料、试剂与仪器  33
    4.2.2 实验方法  33-34
  4.3 实验结果  34-37
    4.3.1 PC12细胞生长的E_2依赖与非依赖性特征  34-35
    4.3.2 ER-α36对低浓度E_2敏感性的影响  35-36
    4.3.3 ER-α36对血清营养剥夺耐受性的影响  36-37
  4.4 讨论  37-39
  4.5 小结  39-40
5 ER-α36敲低对PC12细胞增殖信号通路的影响  40-52
  5.1 前言  40
  5.2 材料与方法  40-45
    5.2.1 材料、试剂与仪器  40-41
    5.2.2 实验方法  41-45
  5.3 实验结果  45-49
    5.3.1 ER-α36介导的不同浓度的E_2的转录激活  45-46
    5.3.2 ER-α36参与血清营养剥夺细胞增殖和存活信号通路的激活  46-48
    5.3.3 ER-α36介导E_2激活的MAPK/ERK、PI3K/Akt信号通路的交叉对话  48-49
    5.3.4 ER-α36对不同浓度E_2激活的MAPK信号通路的影响  49
  5.4 讨论  49-51
  5.5 小结  51-52
结论  52-53
参考文献  53-58
附录A 缩略词  58-59
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  59-61
致谢  61

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脑血管疾病 > 急性脑血管疾病（中风）
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