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移植ERK1/2基因修饰的骨髓间充质干细胞对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用

作　者: 窦玲
导　师: 杨朝鲜
学　校: 泸州医学院
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 缺血性脑卒中 骨髓间充质干细胞移植 细胞外信号调节激酶 细胞移植 大鼠
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：探索细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)基因修饰的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchy-mal stem cells, BMSCs)移植是否比单纯BMSCs移植对缺血性脑卒中有更好的神经保护作用。方法：构建ERK1/2重组质粒并转染BMSCs,建立过表达ERK1/2的BMSCs (ERK1/2/BMSCs),通过对实验动物手术制备大鼠短暂性大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型,并随机分为空载体转染的BMSCs移植组即BV/BMSCs组、ERK1/2基因修饰BMSCs移植组即ERK1/2/BMSCs组和不移植BMSCs组即Control组,再灌注3d时通过脑立体定位分别移植空病毒转染的BMSCs (BV/BMSCs)、ERK1/2基因转染的BMSCs(ERK1/2/BMSCs)和给予生理盐水。细胞移植1周、2周时处死大鼠,用神经功能缺失评分(modified neurological severity score, mNSS)评估不同组缺血性脑卒中大鼠术后神经功能变化、TTC染色评估ERK1/2/BMSCs组、BV/BMSCs和Control组三组大鼠脑梗死体积改变情况、HE染色观察各实验组脑组织病理学变化；尼氏染色计数三组缺血周边额顶叶皮质的神经元数目；荧光显微镜下观察移植ERK1/2/BMSCs组不BV/BMSCsBMSCs宿主脑内存活数量,免疫荧光染色显示胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)在三组MCAO大鼠脑缺血周边区的表达情况。结果：1. RT-PCR和western blot检测显示ERK1/2/BMSCs细胞系过表达ERK1/2。2.与Control组相比,ERK1/2/BMSCs组和BV/BMSCs组的mNSS评分在1W和2W时均明显降低(P<0.05),而且ERK1/2/BMSCs组比BV/BMSCs组的的mNSS评分更低(P<0.01)。3.ERK1/2/BMSCs组和BV/BMSCs组的大鼠脑梗塞体积比Control组显著减少(P<0.05),但ERK1/2/BMSCs组和BV/BMSCs组之间差异无统计学意义(P>0.05)。4.尼氏染色结果显示,1W时ERK1/2/BMSCs组缺血周边区神经元数量显著多于BV/BMSCs组和Control组(P<0.05)；14d时ERK1/2/BMSCs组和BV/BMSCs组缺血周边区神经元数量多于Control组(P<0.05),且ERK1/2/BMSCs组的神经元数量显著多于BV/BMSCs组(P<0.05)。5. ERK1/2/BMSCs组在2w时移植细胞存活数比BV/BMSCs组多(P<0.05),但在1W时两组之间无明显差异(P>0.05)。6.ERK1/2/BMSCs组和BV/BMSCs组的缺血区周围GFAP阳性细胞数高于Control组(P0.05); ERK1/2/BMSCs组又高于BV/BMSCs组(P<0.05)。结论：1、本实验成功构建了稳定表达ERK1/2的BMSCs,移植ERK1/2基因修饰的BMSCs较单纯移植BV/BMSCs更有利于改善MACO大鼠神经缺失症状,促进其运动和感觉功能恢复。2、ERK1/2/BMSCs和BMSCs移植治疗缺血性脑卒中均能减少脑梗死体积,改善组织病理学变化。3、ERK1/2基因修饰能促进BMSCs在脑缺血大鼠脑内的存活,ERK1/2基因修饰的BMSCs比单纯BMSCs移植更有助于MCAO大鼠脑缺血周边区的神经元和星形胶质细胞的存活。

全文目录


摘要  3-5
Abstract  5-8
前言  8-10
材料与方法  10-28
结果  28-39
讨论  39-46
结论  46-47
参考文献  47-52
英汉缩略词对照表  52-53
致谢  53-54
综述  54-64
  参考文献  60-64

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脑血管疾病 > 急性脑血管疾病（中风）
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