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双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞UCHL1转录调节的影响及机制

作 者: 李俊枫
导 师: 罗子国
学 校: 重庆医科大学
专 业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 双氢青蒿素 泛素羧基末端水解酶1 甲基化
分类号: R737.25
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 20次
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内容摘要


目的:研究双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞UCHL1基因转录调节的影响及机制。方法:选取前列腺癌PC-3细胞株,分3组进行培养,5-氮-2’-脱氧胞苷组(2.5μmol/L)和双氢青蒿素组(12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)分别在培养液中加入上述两种药物,阴性空白组不加药物。经培养48小时后,应用荧光定量PCR检测UCHL1及甲基化转移酶的mRNA表达;亚硫酸盐测序法(bisulfate sequencing PCR,BSP)检测UCHL1CpG岛的甲基化状态;蛋白质印迹法检测UCHL1蛋白的表达。结果:流式细胞术结果显示,随着双氢青蒿素剂量增加,PC-3细胞凋亡率明显升高,差异有统计学意义(p<0.05);双氢青蒿素和5-氮-2’-脱氧胞苷分别处理细胞后,UCHL1mRNA表达水平显著上调(p<0.01);UCHL1蛋白表达水平上升(p<0.01);UCHL1的启动子区域甲基化水平明显降低(p<0.01)。双氢青蒿素处理后甲基化转移酶的mRNA表达减少。结论:DHA能诱导前列腺癌PC-3细胞发生凋亡,并存在一定程度的剂量依赖性,随着剂量浓度的增加,促凋亡作用越明显。在低剂量(25μmol/L)浓度条件下, DHA能逆转UCHL1启动子区域的高甲基化状态,使UCHL1基因mRNA表达平均上调207.02倍,其蛋白表达也明显增高(P<0.01),并发挥其抑癌功能。机制可能与DHA下调了DNMT1,DNMT3a,DNMT3b的mRNA表达,使DNMT1,DNMT3a,DNMT3b生成减少,进而降低了UCHL1的甲基化程度。

全文目录


英汉缩略语名词对照  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-12
1 材料、试剂、仪器  12-14
2 方法  14-20
3 结果  20-25
4 讨论  25-28
全文总结  28-29
参考文献  29-31
附图及说明  31-33
文献综述  33-41
  参考文献  38-41
致谢  41-42
攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录  42-43

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 男性生殖器肿瘤 > 前列腺肿瘤
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