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POEMS综合征中λ轻链可变区种系基因限制性表达的研究

作　者: 黄振
导　师: 周道斌
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: POEMS综合征 免疫球蛋白可变区 体细胞突变 序列分析 VEGF
分类号: R597
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


研究背景：POEMS综合征是一种以周围神经病变(P)、脏器肿大(O)、内分泌病变(E)、M蛋白(M)和皮肤改变(S)为主要临床表现的罕见单克隆性浆细胞病,其发病机制目前还不清楚。目前研究多从血清促血管生成细胞因子特别是血管内皮生长因子的异常高表达、周围神经病变的病理表现以及M蛋白在POEMS综合征中的发病意义对疾病进行探讨。最近有少数研究发现,POEMS综合征患者的免疫球蛋白λ轻链可变区(IGLV)基因均属于Vλ1亚家族的IGLV1-40和IGLV1-44型种系基因,提示POEMS综合征患者可能存在IGLV种系基因的限制性表达。研究目的：1.分离并测序POEMS综合征患者的IGLV基因序列,并与基因库的种系基因序列进行比对；2.探讨不同IGLV种系基因患者的临床表现、M蛋白、血清促血管生成细胞因子水平之间的差异；3.测定POEMS综合征患者的血清促血管生成细胞因子水平,探讨其在POEMS综合征疾病病理生理过程中的可能作用。研究方法：采集POEMS综合征患者的骨髓,提取单个核细胞总RNA,反转录为cDNA, PCR扩增并测序IGLV基因序列,与基因库比对,分析IGLV基因型,进行突变比对、临床表现等的统计分析。利用ELISA法测定POEMS综合征患者的血清VEGF, IL-6, TNF-α, TGF-β1水平。研究结果：1.成功分离并扩增了30名POEMS综合征患者的单克隆性IGLV基因序列。与基因库的种系基因序列比对后,有11名患者的种系基因为IGLV1-40型(中位同源性94.10%),有19名患者的种系基因为IGLV1-44型(中位同源性92.28%)。即所有患者的种系基因均为IGLV1-40或1-44型,提示POEMS综合征患者存在着种系基因的限制性表达。进一步的突变分析发现,POEMS综合征患者IGLV的互补性决定区(CDR)内的取代突变R与沉默突变S的比值R/S大于骨架区(FWR)内的R/S比值,提示在患者的克隆性浆细胞的发生过程中存在着抗原选择。2. IGLV1-40与IGLV1-44两种种系基因型的患者在年龄、性别、周围神经病变严重度、脏器肿大、Castleman病、内分泌表现、M蛋白、周围水肿及浆膜腔积液、肺病、骨骼病变、肾脏功能损害等临床表现,以及血红蛋白水平、血小板计数、血清VEGF、IL-6、TGF-β1、TNF-α水平等方面均无统计学显著差异。但IGLV1-40组患者比IGLV1-44组患者更容易出现视乳头水肿(p=0.023)和皮肤多毛(p=0.014)。3.30名POEMS综合征患者的血清VEGF平均值为4061±643pg/ml (以均值±标准误表示,下同),相应的10例λ轻链型多发性骨髓瘤患者的血清VEGF平均值为1806±758pg/ml;10例正常人的血清VEGF平均值为425±100pg/ml。POEMS综合征患者的血清VEGF水平显著高于MM患者(p=0.021)和正常人(p<0.0001)。4.与血清VEGF水平小于1000pg/ml的患者相比,伴有高水平血清VEGF的POEMS综合征患者有着更为严重的周围神经病变,更多的淋巴结病变和肺动脉高压、更低的肾小球滤过率和血红蛋白水平,以及更长的凝血酶原时间及活化的部分凝血活酶时间。研究结论：1. POEMS综合征患者的免疫球蛋白λ轻链可变区基因是种系限制性的,其种系基因为IGLV1-40型或IGLV1-44型,且该IGLV基因经过了抗原选择,这可能与POEMS综合征的发病机制相关。2.不同种系基因的两组POEMS综合征患者在皮肤多毛与视乳头水肿这两方面的临床表现有显著统计学差异。3. POEMS综合征患者的血清VEGF水平异常增高。4.不同VEGF水平的POEMS综合征患者在临床表现上有着显著差异,提示VEGF在POEMS综合征疾病病理生理过程中起着重要作用。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-8
1. 前言  8-10
2. 材料与方法  10-19
  2.1 研究对象与诊断标准  10-11
  2.2 主要仪器与试剂  11-13
  2.3 实验流程  13-14
  2.4 免疫球蛋白λ轻链可变区基因的扩增与测序  14-17
  2.5 序列比对与突变分析  17
  2.6 ELISA法测定血清VEGF、IL-6、TNF-α、TGF-β1水平  17-18
  2.7 统计学分析  18-19
3. 结果  19-38
  3.1 患者免疫球蛋白λ轻链可变区基因序列与IGLV种系基因序列的比对  19-25
  3.2 患者免疫球蛋白λ轻链可变区基因中的突变及其分布  25-27
  3.3 患者的临床特征  27-30
  3.4 患者血清促血管生成细胞因子的水平  30-33
  3.5 不同血清VEGF水平的POEMS综合征患者之间的临床特征比较  33-35
  3.6 两种IGLV种系基因患者的临床特征比较  35-38
4. 讨论  38-43
5. 结论  43-44
参考文献  44-47
附录1. 中英文缩略词表  47-48
综述  48-58
  参考文献  56-58
致谢  58

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 全身性疾病 > 原因未明的疾病
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