学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

普威综合症模型Snord116基因敲除小鼠中Ghrelin水平升高的机制研究

作　者: 林大河
导　师: 靳全文；丁凤
学　校: 厦门大学
专　业: 细胞生物学
关键词: PWS Snord116敲除小鼠 Ghrelin 自主神经
分类号: R589.2
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
下　载: 3次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

普威综合症是一种最常见的由遗传因素引起的肥胖症。主要由于父系15号染色体上的q11-13区段的DNA缺失导致的。目前认为Snord116是导致PWS的最关键基因。PWS患者最显著的症状包括过量进食、肥胖及血液ghrelin激素含量高于正常人2-3倍。为了揭示隐藏在PWS症状背后的机制以便更好地帮助患者,我们构建了敲除Snord116的B6小鼠,试图以该敲除鼠为模式动物探寻人类PWS血液ghrelin激素升高的机制,希望将来可以为治疗PWS提供一些理论依据。由于ghrelin能够促进胃蠕动,故我们怀疑Snord116敲除鼠贪食的原因可能与血液中高水平的ghrelin促进了胃排空有空。因此我们首先检测了Snord116敲除鼠与野生型小鼠的胃排空率,发现敲除鼠的胃排空率显著低于野生型小鼠。这说明敲除小鼠的贪食现象并非由于胃排空加快引起的。血液中的ghrelin主要由胃分泌,因此我们分别利用组织的免疫荧光检测了小鼠胃中ghrelin细胞的分布,以及利用RNA原位杂交技术检测了野生型小鼠胃中Snord116的分布情况。我们发现ghrelin细胞分布在小鼠中、后胃的粘膜层中下部；而Snord116仅分布在胃壁环状肌和纵状肌之间。由于ghrelin与Snord116并不共定位于同一个细胞内,这表明Snord116不可能直接影响ghrelin细胞。随后我们比较了两种小鼠胃内ghrelin的mRNA水平及ghrelin的蛋白水平,发现两种小鼠胃内的ghrelin mRNA水平相差不多,但是整胃ghrelin的蛋白水平显著低于野生型小鼠。这向我们暗示了导致敲除小鼠血液ghrelin水平升高的原因可能并非由于敲除小鼠合成了更多的ghrelin蛋白,而是因为胃的ghrelin细胞过量分泌了ghrelin造成的。导致敲除小鼠胃ghrelin细胞过量分泌的可能原因有两方面。一是由于胃ghrelin细胞异常,对胞外正常的促分泌信号过度敏感,从而导致过量分泌；二是胞外存在一个较强的促分泌信号持续刺激胃ghrelin细胞,导致过量分泌,但胃ghrelin细胞本身是正常的。为了区分这两种不同的情况,我们给两种小鼠注射毒蕈碱受体激动剂、α1-肾上腺素能受体拮抗剂、β-肾上腺素能受体激动剂,发现这3种药物均可显著增加野生型和敲除型小鼠的血清Ghrelin水平,并且两种小鼠的增加的幅度没有显著差别,说明敲除小鼠体内Ghrelin细胞本身和野生型小鼠的正常ghrelin细胞对强度一致的胞外信号的反应基本是相同的。因此在敲除鼠中Ghrelin失调的原因并非因为Ghrelin细胞存在异常,而更有可能是由于敲除鼠体内对Ghrelin细胞的信号刺激过强导致的。

全文目录

摘要  10-12
Abstract  12-14
第1章前言  14-36
  1.1 Prader willi综合症  14-16
  1.2 Snord116基因敲除小鼠模型  16-21
    1.2.1 构建Snord116基因敲除小鼠  16-18
    1.2.2 Snord116敲除鼠的表型与PWS患者有众多相似之处  18-21
  1.3 Ghrelin的结构、功能和调节机制  21-31
    1.3.1 Ghrelin的发现过程  21
    1.3.2 Ghrelin的结构  21-23
    1.3.3 Ghrelin受体(GHS-R)  23
    1.3.4 Ghrelin辛酰基转移酶(GOAT)  23-24
    1.3.5 Ghrelin的分布和调节  24-26
    1.3.6 Ghrelin影响GH的分泌  26-27
    1.3.7 Ghrelin可以调节食欲  27-28
    1.3.8 Ghrelin影响学习和记忆  28
    1.3.9 与Ghrelin有关的药物  28-30
    1.3.10 Ghrelin的其他功能  30
    1.3.11 Ghrelin与PWS的联系  30-31
  1.4 调节胃的神经系统  31-34
    1.4.1 胃肠的内在神经系统对消化器官活动的调节  32
    1.4.2 消化管的内分泌细胞  32-33
    1.4.3 自主神经对胃的运动和分泌的影响  33
    1.4.4 自主神经对胃Ghrelin分泌的影响  33-34
  1.5 本课题研究的目的、意义及内容  34-36
第2章实验材料与方法  36-70
  2.1 实验用菌株、小鼠品系、软件及主要质粒  36
  2.2 主要试剂、酶及试剂盒  36-39
  2.3 主要仪器  39-41
  2.4 常用培养基和缓冲液配方  41-49
    2.4.1 分子克隆用试剂及配方  41-43
    2.4.2 组织免疫荧光相关试剂及配方  43-44
    2.4.3 原位杂交试剂及配方  44-47
    2.4.4 生化实验用试剂配方  47-48
    2.4.5 药理学实验相关药品配制  48-49
  2.5 实验方法  49-70
    2.5.1 分子克隆一般方法  49-56
    2.5.2 实时定量PCR(Realtime-PCR,RT-PCR)  56-57
    2.5.3 酸萃取小鼠整胃ghrelin  57
    2.5.4 SDS-PAGE蛋白电泳  57-58
    2.5.5 免疫印记实验(Western blot)  58
    2.5.6 组织的切片HE染色及免疫荧光染色  58-61
    2.5.7 RNA原位杂交方法  61-65
    2.5.8 药理学实验  65-68
    2.5.9 统计学方差计算方法  68
    2.5.10 Ghrelin含量标准曲线的绘制  68-70
第3章结果与分析  70-85
  3.1 Snord116敲除小鼠胃排空率下降  70-71
  3.2 Snord116敲除鼠血液中ghrelin水平升高的机制  71-82
    3.2.1 Snord116敲除鼠血液中ghrelin水平较高并非由胃过量合成ghrelin导致  71-75
    3.2.2 Snord116敲除鼠血液中ghrelin水平较高是由于其胃过量分泌ghrelin导致的  75-82
  3.3 探索Snord116敲除小鼠ghrelin过量分泌的分子机制  82-85
第4章讨论与展望  85-90
  4.1 总结  85
  4.2 促使Snord116敲除鼠胃过量分泌的可能信号来源  85-87
  4.3 Snord116通过调控胃自主神经系统来调节胃平滑肌的运动  87
  4.4 Snord116敲除鼠胃感受机械拉伸可能存在障碍  87-88
  4.5 Snord116敲除鼠血液中高水平的ghrelin与贪食的关系  88
  4.6 Snord116敲除鼠血液ghrelin升高可能的分子机制  88-90
第5章参考文献  90-98
致谢  98

普威综合症模型Snord116基因敲除小鼠中Ghrelin水平升高的机制研究

内容摘要

全文目录

相似论文