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小檗碱对高脂合并STZ诱导的糖尿病肾病大鼠前列腺素受体表达的影响

作　者: 朱玲娜
导　师: 唐丽琴
学　校: 安徽中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 小檗碱糖尿病肾病 PGE2 前列腺素受体 cAMP
分类号: R587.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：通过研究对高糖高脂合并小剂量链脲佐菌素（streptozotocin，STZ)诱导的糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）大鼠肾皮质中前列腺素受体EP1、EP2、EP3和EP4蛋白表达的情况及小檗碱的作用，以期寻找出在DN发病过程中有特殊生理病理意义的前列腺素受体亚型。并探讨BBR对DN大鼠的作用及可能的作用靶点。方法：雄性SD大鼠先给予6周的高脂饲料后,造模前先用血糖仪测定大鼠血糖，将血糖异常大鼠剔除，然后禁食不禁水12h后腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin，STZ)35mg/kg，诱导大鼠糖尿病模型。72h后眼眶取血测定空腹血糖值，将血糖值≥11.1mol/L者纳入实验，并将造模成功的大鼠随机分成6组，分别是DN模型组、BBR组（200、100、50mg/kg）和阳性药对照组依那普利组（1mg/kg）和消渴丸组（800mg/kg）,另设正常对照组（未注射STZ，普通饲料喂养）和高脂对照组（未注射STZ,高脂饲料喂养）。除了正常组以外，其余组均给予高脂饲料喂养。给药组灌胃给药8周，对照组和高脂对照组灌胃给予0.5%羧基纤维素钠（CMC-Na）配制的混悬液。实验期间观察大鼠的一般状况，每1周测定大鼠体重，每2周尾尖取血测定血糖值。给药8周后，将大鼠放入代谢笼中,收集24h尿液，然后处死动物并股动脉取血,分离血清。检测大鼠的24h尿蛋白总量（UP）、24小时尿微量白蛋白（UmAlb）、尿肌酐（Ucr）、尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）；取大鼠肾脏,计算相对肾重（肾重/体重，KW/BW）；对肾脏皮质进行HE和Masson染色，并用光镜观察肾脏组织病理学变化，电镜观察肾小球超微结构；酶联免疫吸附技术(ELISA)检测IL-6和PGE2水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾皮质的EP1、EP2、EP3和EP4的蛋白表达水平；放射性免疫法测肾皮质的cAMP水平。结果：1.BBR对DN大鼠体重和血糖的影响在第2周，模型组大鼠体重与高脂对照组比较显著降低；在第3周，模型组大鼠体重与正常对照组比较显著降低；各给药组可减缓模型大鼠体重的下降，但差异没有统计学意义DN模型组大鼠与正常组大鼠相比，血糖水平显著升高，小檗碱（200mg/kg/d、100mg/kg/d）给药6-8周后，能显著的降低血糖水平。2. BBR对DN大鼠肾功能指标的影响实验结果发现，模型大鼠的相对肾重（KW/BW）、微量白蛋白/尿肌酐比值（U.A/C）、总蛋白/尿肌酐比值（UP24h/C）、尿素氮（BUN）、尿肌酐（Ucr）、血肌酐(SCr)水平与正常对照组相比都显著升高，BBR (200mg/kg，100mg/kg)可有效地改善DN大鼠的肾功能指标的异常。3. BBR对DN大鼠肾脏组织病理学的影响肾脏病理组织学镜下观察可见正常对照组大鼠肾小球结构清晰，球囊壁光滑，毛细血管腔清晰，间质无炎症和纤维化。高脂饲料组与正常对照组比较，肾小球轻度增大，肾小球肿胀，肾小囊变窄；DN模型组大鼠肾小球明显增大，肾小囊变窄，部分肾小球已硬化，肾小管部分出现细胞肥大，管腔变窄等病变。Masson染色可见模型组大鼠肾小球大量染成绿色的胶原纤维。BBR给药后与模型组相比，可以明显地改善这些病变。4. BBR对DN大鼠肾组织超微结构的影响经电镜下观察发现，DN模型组与正常组相比较，肾小球肿胀变大，肾小球基底膜明显增厚，局部足细胞足突大片融合甚至消失并且排列紊乱，系膜细胞增多，系膜基质增多；BBR给药后，可抑制肾小球基底膜增厚程度，有效地改善了以上症状。5. BBR对DN大鼠IL-6及PGE2水平的影响与正常组大鼠相比，DN模型组大鼠血清中IL-6水平明显升高，BBR (200mg/kg，100mg/kg)给药可以有效地降低血清中IL-6的水平。肾组织中PGE2的水平在DN模型组显著的升高。BBR (200mg/kg，100mg/kg)可以明显地降低PGE2的水平。6. BBR对DN大鼠肾皮质中EPs蛋白表达水平的影响Westernblot检测结果发现，DN大鼠肾皮质中EP1和EP3蛋白表达水平与正常组相比有明显地升高，EP4蛋白表达有所降低，而EP2没有明显的差异，BBR(200mg/kg,100mg/kg)给药可不同程度地下调DN大鼠肾皮质中升高的EP1和EP3蛋白表达水平。上调DN大鼠肾皮质中下降的EP4蛋白表达水平。7. BBR对DN大鼠肾皮质中cAMP水平的影响放射免疫分析法检测结果发现，与正常组相比，DN模型组大鼠cAMP水平呈明显降低趋势，BBR(200mg/kg,100mg/kg)给药可明显提高cAMP水平。结论：1.BBR给药能显著降低模型组升高的血糖，改善DN大鼠肾脏的病理学病变和肾功能，但BBR给药对DN大鼠的体重影响并不明显。2.BBR给药能显著降低DN大鼠炎性细胞因子IL-6和PGE2的水平。3.DN模型大鼠肾皮质EPs蛋白表达水平及cAMP水平均出现异常，BBR给药可不同程度地调控EPs的表达，同时上调cAMP水平。DN时，PGE2-EP-cAMP发生异常改变，BBR可能通过调节PGE2-EP-cAMP的正常转导而发挥对DN的防治作用。

全文目录

英文缩略词表  6-8
中文摘要  8-11
英文摘要  11-16
1 前言  16-19
2 实验材料  19-22
  2.1 动物与饲料  19
  2.2 药物和试剂  19-21
  2.3 仪器与设备  21-22
3 实验方法  22-30
  3.1 大鼠 DN 模型的建立  22-23
  3.2 实验分组与给药方案  23
  3.3 一般状况、体重和血糖值的测定  23
  3.4 DN 大鼠肾功能指标检测  23
  3.5 肾脏病理学组织检查  23-24
  3.6 电镜下观察肾小球超微结构  24
  3.7 酶联免疫吸附技术(ELISA)测血清中 IL-6 水平  24-25
  3.8 酶联免疫吸附技术(ELISA)测肾皮质中 PGE2 水平  25
  3.9 蛋白质免疫印迹法（ Western blot ）检测前列腺素受体EP1、EP2、 EP3 和 EP4 在肾皮质中的表达  25-29
    3.9.1 大鼠肾皮质总蛋白的提取  25-26
    3.9.2 蛋白定量  26-27
    3.9.3 Western blot 操作步骤  27-29
  3.10 放射免疫分析法检测肾皮质中 cAMP 水平  29-30
  3.11 统计学处理  30
4 结果  30-43
  4.1 BBR 给药对 DN 大鼠的一般状况和体重的影响  30-32
  4.2 BBR 对 DN 大鼠空腹血糖的影响  32-33
  4.3 BBR 给药对 DN 大鼠肾功能指标的影响  33-35
  4.4 BBR 对 DN 大鼠肾脏组织病理学的影响  35-37
  4.5 BBR 对 DN 大鼠肾小球超微结构的影响  37
  4.6 BBR 对 DN 大鼠血清中 IL-6 水平的影响  37-38
  4.7 BBR 对 DN 大鼠肾皮质中 PGE2 水平的影响  38-39
  4.8 BBR 给药对 DN 大鼠肾皮质中 EP1、EP2、EP3 和 EP4 表达的影响  39-42
  4.9 BBR 对 DN 大鼠肾皮质中 cAMP 水平的影响  42-43
5 讨论  43-52
  5.1 BBR 对 DN 大鼠肾病变的保护作用  43-46
  5.2 BBR 抑制炎性细胞因子可能是其发挥作用原因之一  46-47
  5.3 BBR 对 DN 大鼠肾脏的保护作用可能与其调节 PGE2-EPs-cAMP 信号转导通路有关  47-52
6 结论  52-53
参考文献  53-58
综述：前列腺素受体及其在糖尿病肾病中作用的探讨  58-70
  参考文献  66-70
附录  70-71
致谢  71

小檗碱对高脂合并STZ诱导的糖尿病肾病大鼠前列腺素受体表达的影响

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