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1、IL-17基因多态性与中国汉族人IBD的关系 2、活动期CD患者血清MicroRNAs表达谱的研究

作　者: 于鹏丽
导　师: 张红杰
学　校: 南京医科大学
专　业: 内科学
关键词: 炎症性肠病 UC CD IL-17 基因多态性 miRNAs 克罗恩病(CD) 溃疡性结肠炎(UC) 肠易激综合征(IBS)
分类号: R574
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

[背景]炎症性肠病(inflammatory bowel diseases,IBD)包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn’s disease,CD),是严重影响人类健康的慢性肠道非特异性炎症性疾病。其病因和发病机制至今还不是很明确,目前认为是由环境、免疫以及遗传等多种因素相互作用所致。IL-17F和IL-17A均来自于IL-17细胞因子家族,该家族共包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、 IL-17E(IL-25)和IL-17F六个家族成员。其中IL-17A和IL-17F具有高度同源性(约有50%的相同氨基酸),在机体免疫调节和炎症反应过程中均发挥重要作用。IL-17A和IL-17F主要由IL-23R+Th17细胞分泌,是其发挥作用的主要效应因子。最新的研究表明"IL-23/IL-17"在IBD发病中起着重要作用,已有研究证实IL-23R基因多态性与IBD的发病相关,关于IL-17A/IL-17F基因多态性与IBD的相关研究较少。IL-17A(rs2275913)和IL-17F(rs763780)基因多态性已被证实与日本人UC的易感性相关,在国内也有相关研究认为IL-17F(rs763780)为UC的保护性因素。我们总结近几年关于IL-17A/F基因多态性与免疫相关性疾病的研究,选择与炎症反应和自身免疫性疾病关系较密切的5个IL-17A/F多态性位点,进一步研究其与中国汉族人IBD的关系。[目的]：1.研究IL-17A和IL-17F基因多态性与中国汉族人IBD易感性之间的关系。2.研究IL-17A和IL-17F基因多态性与IBD临床表现之间的关系。[方法]：1.各受试者均抽取外周静脉血2ml,乙二胺四乙酸EDTA-K2抗凝。4小时内在4℃、3000转/分条件下离心10min,将血清与血细胞分离。2.血细胞使用北京TianGen公司血液非离心柱型(0.1-20ml)基因提取试剂盒提取DNA。2.5%琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA的完整性和纯度。-80℃储存待用.3.运用LDR(ligase detection reaction allelic,连接酶检测反应)技术检测IL-17A和IL-17F基因多态性。4.采用SPSS17.0软件进行数据分析。[结果]：1.CD患者中IL-17F(rs763780,7488T/C)突变等位基因C的频率明显高于对照组(13.8%vs8.4%, P=0.044, OR=1.74,95%CI=1.01-2.99)。2.在亚型分析中,rs763780基因多态性与CD病变范围有关,突变等位基因C在CD回结肠型患者中的频率明显高于对照组(P=0.02)。3.IL-17A (rs2275913,G-197A)与UC患者疾病的严重程度有弱的相关性,含有突变基因A的患者倾向于临床轻型。4.IL-17F (rs763780,7488T/C)多态性与UC患者发病年龄之间有弱的相关性,T/C基因型患者的发病年龄较年轻(P=0.046)。[结论]：1.IL-17Frs763780基因多态性与CD易感性之间有相关性。2.亚组分析中发现rs763780与CD的病变范围和UC的发病年龄有关。IL-17A rs2275913基因多态性与UC疾病严重程度呈负相关。[背景]MicroRNAs (miRNAs)是一类长约21～22个核苷酸的非编码单链RNA序列,广泛存在于植物、线虫和人类的各种细胞中。miRNAs由内源性基因编码,可通过诱导mRNA的切割降解,翻译抑制或者其他形式的调节机制抑制靶基因的表达。另外,miRNAs还具有控制细胞分化、增殖和凋亡等多种功能,对基因功能研究、人类疾病防治及生物进化探索有重要意义。目前,已有大量研究证实了miRNAs与肿瘤之间的关系,通过对人肺癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、甲状腺癌以及胰腺癌等组织中(?)miRNAs表达的分析,发现每一种肿瘤都有若干特定的miRNAs的表达水平相对于正常组织发生了变化。同样,在自身免疫性疾病中也有着类似的发现,例如(?)miR-146a、miR-155、miR-181a、miR-150等在不同的免疫细胞中均有不同水平的表达,并且在机体的免疫反应过程中起着重要的作用。炎症性肠病(Inflammatory bowel disease, IBD)包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)和克罗恩病(Crohn’s disease, CD),其病因和发病机制尚未完全明确。有研究证实,肠道黏膜免疫系统对肠道非致病性抗原的异常免疫反应在其发病中起重要作用。目前已有少量研究报道,在炎症性肠病患者的组织、外周血中均存在着miRNAs的表达异常。本研究旨在筛选与确定活动期CD患者血清中特异性的miRNAs表达谱。[目的]1.筛选与初步确定活动期CD特异性的血清(?)miRNAs表达谱。2.检测该表达谱在活动期UC及功能性肠病(D-IBS)患者血清中的表达情况,以进一步验证其特异性。[方法]：1.各受试者均抽取外周静脉血2ml,乙二胺四乙酸EDTA-K2抗凝。4小时内在4℃、3000转/分条件下离心10min,将血清与血细胞分离。2.准备10ml混合血清(活动期CD10例、对照组10例,各组混合血清10ml),用Solaxa法提取血清miRNAs,送低密度芯片检测。3.将芯片结果分析后,筛增高或者减低2倍以上的miRNAs进一步进行小样本量(活动期CD26例,对照组26例)CD血清miRNAs的定量PCR验证,进行下一步筛选。4.定量PCR法将再次筛选的结果进行扩大样本量(活动期CD68例,对照组68例)CD血清miRNAs验证。5.将最终筛选的miRNAs在活动期UC(活动期UC26例,对照组26例)及D-IBS (D-IBS22例,对照组22例)患者血清中进行验证。[结果]1.低密度芯片分析结果显示在活动期CD患者血清中有19个miRNAs的表达同对照组明显不同(其中10个增高miRNAs,9个减低miRNAs)。2. RT-qPCR初步验证结果显示活动期CD患者有7个血清miRNAs (miR-126*, miR-140, miR-19a, miR-19b, miR-25, miR-212, miR-155)与健康对照比较有显著变化。3.在活动期CD中明显变化的上述7个miRNAs,有5个miRNAs (miR-126*, miR-140, miR-19a, miR-25, miR-212)在活动期UC中无显著变化,而在活动期CD中明显增高的miR-19b在活动期UC表达明显减低。4.与对照组比较,在活动期CD中明显变化的7个miRNAs,有6个miRNAs (miR-126*, miR-19a, miR-19b, miR-25, miR-212, miR-155)在腹泻型IBS中无明显变化。[结论]经过筛选与进一步验证,我们发现活动期CD患者血清中miR-126*, miR-140, miR-19a, miR-19b, miR-25, miR-155表达增高,miR-212表达减低,上述变化的miRNAs有可能成为活动期CD血清学的特异性miRNAs表达谱。

全文目录

第一部分：IL-17 基因多态性与中国汉族人IBD的关系  4-32
  中文摘要  4-6
  Abstract  6-8
  前言  8-10
  材料与方法  10-16
  结果  16-23
  讨论  23-26
  结论  26-27
  参考文献  27-32
第二部分：活动期CD患者血清miRNAs表达谱的研究  32-60
  中文摘要  32-35
  英文摘要  35-38
  前言  38-40
  一、材料  40-42
  二、方法  42-47
  结果  47-52
  讨论  52-55
  结论  55-56
  参考文献  56-60
综述  60-72
  参考文献  68-72
攻读学位期间情况  72-73
致谢  73

1、IL-17基因多态性与中国汉族人IBD的关系 2、活动期CD患者血清MicroRNAs表达谱的研究

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