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青心酮对低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

作　者: 李彩霞
导　师: 林春龙
学　校: 南华大学
专　业: 呼吸内科
关键词: 青心酮低氧人肺动脉平滑肌细胞细胞增殖 PCNA
分类号: R563.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的应用青心酮（3,4-dihydroxyacetophenone,DHAP）干预低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞（human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs）增殖，初步探讨其对HPASMCs增殖的抑制效果和机制。方法原代培养HPASMCs，随机分成：①常氧组、②低氧组、③DHAP1组(低氧+DHAP0.6×10^-4mol/L)、④DHAP2组(低氧+DHAP3.3×10^-4mol/L)和⑤DHAP3组(低氧+DHAP6.0×10^-4mol/L)。应用流式细胞技术检测细胞周期，噻唑蓝（methylthiazolyl diphenyl tetrazolium bromide,MTT）比色法测定细胞增殖情况，细胞免疫组织化学技术检测细胞PCNA表达，Western-blot方法检测PCNA蛋白表达量，Fluo-3和激光扫描共聚焦显微镜技术评价DHAP对低氧诱导的HPASMCs增殖及HPASMCs[Ca2+]i调节的作用。结果流式细胞学显示：低氧组G0/G1期细胞比例为77.77±1.05（%），S期比例为14.39±1.73（%）；而常氧组G0/G1期细胞比例为92.46±0.87（%），S期比例为4.20±0.85（%）。缺氧24h，G0/G1期细胞比例减少，S期比例增高，与常氧组相比，差异具有统计学意义（P<0.01or0.05）。DHAP1组G0/G1期细胞比例为85.88±1.57（%），而S期细胞比例为9.63±1.99（%）；DHAP2组G0/G1期细胞比例为89.45±1.48（%），而S期细胞比例为4.05±0.77（%）；DHAP3组G0/G1期细胞比例为86.47±1.48（%），而S期细胞比例为2.00±0.08（%）。DHAP1、DHAP2、DHAP3组分别与缺氧组相比较，G0/G1期细胞比例增高，S期细胞比例降低，各组之间差异有统计学意义（P <0.05），且在一定范围内，随着DHAP浓度的增高，这种差异有增加的趋势，两两组间比较，差异均具统计学意义（P <0.05）（见图10，表2）。MTT法酶标仪在570nm处测各孔吸光度值（OD值）分别为，低氧组：0.250±0.028、DHAP1组：0.190±0.009、DHAP2组：0.170±0.015、DHAP3组：0.160±0.023。结果显示：DHAP各组OD值均低于低氧组（P <0.05），且在一定范围内，OD值随着DHAP浓度的增高呈下降趋势，两两比较差异有统计学意义（P <0.05）。免疫组织化学技术显示PCNA染色主要位于细胞核，Western-blot结果显示低氧组PCNA/Actin的比值为0.322±0.021，高于常氧组（0.025±0.002）（P <0.05）和DHAP1组（0.063±0.004）、DHAP2组（0.055±0.004）、DHAP3组（0.037±0.002）（P<0.05），提示在一定范围内，随着DHAP剂量的增加，PCNA/Actin的比值下降，组间差异具有统计学意义（P <0.05）。钙离子荧光探针（Fluo-3）与激光共聚焦显微镜显示各组间的[Ca2+]i荧光强度在常氧组、低氧组、DHAP1组、DHAP2组、DHAP3组分别为：25.0±8.9、64.0±10.2、30.0±9.5、23.0±8.4、17.0±3.5。结果显示低氧组[Ca2+]i荧光强度明显高于常氧组，两组比较，差异具有统计学意义（P <0.05）。DHAP各组[Ca2+]i荧光强度低于低氧组；在一定范围内，随着DHAP浓度的增加，[Ca2+]i荧光强度呈下降趋势，两两组间比较，差异有统计学意义（P <0.05）。说明低氧诱导HPASMCs内[Ca2+]i显著增加，在DHAP应用后，能拮抗低氧诱导的HPASMCs内[Ca2+]i升高，从而抑制HPASMCs的增殖。结论1.低氧刺激HPASMCs增殖。2.青心酮抑制低氧诱导的HPASMCs增殖。3.青心酮降低细胞内[Ca2+]i浓度增加，从而抑制低氧状态下HPASMCs的增殖。4.青心酮改善人肺循环的作用机制可能与其有关。

青心酮对低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

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