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氨氯地平对氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞荷脂过程及Caveolin-2表达的影响

作　者: 卢琼
导　师: 涂玉林
学　校: 南华大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: RAW264.7巨噬细胞 氨氯地平 氧化低密度脂蛋白 小凹蛋白-2 小凹蛋白-1 荷脂细胞
分类号: R543.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


一、Caveolin-2在氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7细胞荷脂过程中表达的变化目的：通过观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的RAW264.7巨噬细胞荷脂过程中Caveolin-2蛋白质的表达改变。方法：实验采用浓度为50mg/L的ox-LDL与RAW264.7巨噬细胞共同孵育48h，用免疫印迹法(Western blot)检测Caveolin-2蛋白质的表达改变，再通过油红O染色、高效液相色谱法分别观察细胞内的荷脂过程。结果：随ox-LDL孵育细胞时间的延长，Caveolin-2蛋白质的表达逐渐减弱，差异有显著性(P<0.05)。油红O染色显示细胞胞浆内大量脂滴存在，高效液相色谱法检测到细胞内胆固醇酯/总胆固醇比值为45.4%±1.9%，结果表明这些细胞符合荷脂细胞特征。结论：Ox-LDL下调RAW264.7细胞荷脂过程中Caveolin-2的蛋白表达。二、氨氯地平对ox-LDL诱导的巨噬细胞荷脂过程中Caveolin-1和Caveolin-2表达及胆固醇流出的影响目的：观察氨氯地平对ox-LDL诱导的RAW264.7细胞荷脂过程中Caveolin-1与Caveolin-2表达及胆固醇流出的影响，进一步探讨氨氯地平的抗动脉粥样硬化作用。方法：在第一部分实验基础上，ox-LDL组采用50mg/L处理细胞48h，细胞分为3组：对照组、ox-LDL处理组和氨氯地平+ox-LDL处理组，油红O染色、高效液相色谱法观察巨噬细胞荷脂过程，Western-blot检测Caveolin-1、Caveolin-2蛋白质的表达改变，免疫荧光法检测Caveolin-2的表达变化，液体闪烁计数仪检测细胞内胆固醇流出率，进而分析氨氯地平对ox-LDL诱导的巨噬细胞荷脂过程中Caveolin-2表达及对胆固醇流出的作用。结果：油红O染色显示ox-LDL组细胞内大量脂滴形成，高效液相色谱法显示细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值为45.4%±1.9%，建立巨噬细胞荷脂模型；预先予氨氯地平处理后再加ox-LDL，细胞内脂滴明显减少，总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯以及胆固醇酯/总胆固醇的比值均明显降低，结果与对照组接近。Western-blot检测发现，ox-LDL组细胞内Caveolin-1、Caveolin-2蛋白质的表达明显减弱；预先用氨氯地平处理后再加ox-LDL，可使细胞内Caveolin-1与Caveolin-2蛋白质的表达均大幅回升，较ox-LDL组有显著性差异。免疫荧光法检测发现ox-LDL组细胞内Caveolin-2的表达明显减弱；预先用氨氯地平处理后再加ox-LDL，可使细胞内Caveolin-2蛋白质的表达增强。细胞内胆固醇流出率在ox-LDL组明显减少，而预先用氨氯地平处理后再加ox-LDL组回升明显。结论：氨氯地平预先处理，可上调ox-LDL诱导巨噬细胞荷脂过程中Caveolin-1与Caveolin-2蛋白质的表达，促进细胞内的胆固醇流出。结论：1ox-LDL下调RAW264.7细胞荷脂过程中Caveolin-2的蛋白表达；2氨氯地平可上调ox-LDL诱导巨噬细胞荷脂过程中Caveolin-1与Caveolin-2蛋白质的表达，促进细胞内的胆固醇流出。

全文目录


中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
引言  9-11
实验材料  11-13
  一 主要试剂和来源  11
  二 主要仪器及设备  11-13
实验方法  13-16
  1 细胞培养  13
  2 低密度脂蛋白的分离 修饰及鉴定  13
  3 细胞分组  13-14
  4 Western-blot 检测 Caveolin-1 Caveolin-2 β-actin 蛋白的表达  14
  5 油红 O 染色  14
  6 高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量  14-15
  7 间接免疫荧光(Immunofluorescence, IF)法检测细胞 Caveolin-2的表达  15
  8 细胞胆固醇流出率的检测  15
  9 统计学处理  15-16
实验结果  16-25
  一 Caveolin-2 在氧化低密度脂蛋白诱导的 RAW264.7 细胞荷脂过程中表达的变化  16-19
  二 氨氯地平对 ox-LDL 诱导的巨噬细胞荷脂过程中 Caveolin-1 Caveolin-2 表达及胆固醇流出的影响  19-25
讨论  25-29
结论  29-30
参考文献  30-34
附录  34-36
文献综述  36-48
硕士期间发表的论文  48-49
致谢  49

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