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前扣带回皮质ERK1/2的活化对乙酸诱导小鼠急性内脏痛相关焦虑样行为的作用

作　者: 钟小林
导　师: 张建一
学　校: 中南大学
专　业: 生物学
关键词: 前扣带回皮质(ACC) 细胞外信号调节激酶(ERK1/2) 内脏痛 焦虑样行为
分类号:
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 21次
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内容摘要


目的探讨在乙酸诱导的急性内脏痛模型中,小鼠前扣带回皮质(ACC)内磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达的时空变化及可能作用。方法本研究采用正常的成年雌性昆明小鼠作为研究对象。实验组小鼠腹腔注射0.6%的乙酸(10ml/kg)建立急性内脏痛模型,对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。实验以腹壁收缩次数为指标观察动物的内脏痛反应。采用免疫组织化学和Western Blot检测小鼠ACC内p-ERK1/2表达的时程变化,免疫荧光双标法检测p-ERK1/2在GABA能神经元的表达情况。为了探讨ERK1/2的活化对乙酸诱导的小鼠内脏疼痛及痛相关的焦虑样行为的影响,在注射乙酸30分钟前皮下给予小鼠MEK的抑制剂SL327(30mg/kg)抑制ERK1/2的磷酸化,然后检测小鼠的痛反应及痛相关的焦虑样行为。结果腹腔注射乙酸后小鼠前扣带回皮质区p-ERK1/2呈双相性增高表达：腹腔注射0.6%的乙酸后1小时内小鼠的腹壁收缩次数明显高于对照组(p<0.0001),说明0.6%的乙酸能诱导小鼠产生急性内脏痛反应。免疫组织化学和Western Blot结果均显示乙酸注射后小鼠ACC内ERK1/2被快速的激活(磷酸化),而且p-ERK1/2的表达具有双相性。在乙酸注射后10min时小鼠ACC内p-ERK1/2的表达明显上调,p-ERK1/2的免疫阳性细胞数明显高于正常对照组(p<0.001),而在乙酸注射30min时小鼠ACC内p-ERK1/2的表达降低,恢复至对照组水平(p>0.05),但在乙酸注射1hr时小鼠ACC内p-ERK1/2的表达又有明显增强,与对照组相比阳性细胞数明显增多(p<0.05),而在乙酸注射2hr时小鼠ACC内p-ERK1/2的阳性细胞数又恢复至基础水平(p>0.05)。同时,Western Blot结果还显示小鼠ACC内总ERK1/2在各时间点的表达实验组与对照组相比没有明显的差异(p>0.05)。注射乙酸10mmin时小鼠前扣带回皮质内p-ERK1/2与GAD没有明显的共表达：免疫组织化学和Western Blot结果均显示在乙酸注射10min时小鼠ACC内p-ERK1/2的表达达到峰值,为了检测此时ACC内p-ERK1/2在何种细胞类型中表达,我们采用免疫荧光双标法检测了p-ERK1/2与GAD67(GABA能神经元标记物)的共表达情况。结果发现ACC内p-ERK1/2与GAD67没有明显的共存。皮下注射MEK的抑制剂SL327不能有效减轻乙酸诱导的小鼠内脏疼痛反应,但能有效缓解小鼠痛相关的焦虑样行为：小鼠皮下给予SL327(30mg/kg)或同剂量的DMSO (SL327的溶剂),30分钟后再向两组小鼠腹腔给予0.6%的乙酸。免疫组织化学结果显示乙酸注射10min时实验组(SL327组)小鼠ACC内p-ERK1/2的免疫阳性细胞数与对照组(DMSO组)相比明显减少(p<0.001),说明SL327皮下注射能明显抑制乙酸诱导的小鼠ACC内ERK1/2的激活。两组小鼠在乙酸注射后1小时内的腹壁收缩次数的结果显示实验组小鼠的腹壁收缩次数与对照组相比差异不具有统计学意义(p>0.05)；高架十字迷宫结果显示乙酸注射2小时后SL327组小鼠在开放臂停留的时间百分比明显高于对照组,差异具有显著性(p<0.001),旷场结果显示乙酸注射2小时后SL327组小鼠在中央格停留的时间百分比明显高于对照组,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论腹腔乙酸注射能明显诱导小鼠产生内脏痛反应,在此过程中小鼠ACC内p-ERK1/2的表达呈双相性升高,而且ERK1/2的活化不在GABA能神经元中,抑制p-ERK1/2的表达对小鼠内脏痛反应无影响,但能明显减轻小鼠内脏痛相关焦虑样行为,提示ACC内ERK1/2的激活可能参与调节乙酸诱导的小鼠内脏痛相关的焦虑样行为。(图7幅,参考文献63篇)

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
符号说明  9-10
1 前言  10-12
2 材料与方法  12-17
  2.1 实验动物  12
  2.2 主要的实验试剂与仪器  12-13
  2.3 实验方法  13-16
    2.3.1 模型的建立及分组  13
    2.3.2 行为学检测  13-14
    2.3.3 p-ERK1/2表达的检测  14-16
  2.4 数据统计学分析  16-17
3 结果  17-22
  3.1 乙酸诱导小鼠产生内脏痛反应  17
  3.2 腹腔注射乙酸后小鼠前扣带回皮质区ERK1/2呈双相性激活  17-19
  3.3 乙酸注射10min时小鼠ACC内p-ERK1/2和GAD的共表达  19-20
  3.4 MEK的抑制剂SL327皮下注射不能有效减轻乙酸诱导的小鼠内脏疼痛反应,但能有效缓解小鼠痛相关的焦虑样行为  20-22
4 讨论  22-26
  4.1 乙酸诱导内脏痛小鼠ACC内ERK1/2呈双相性激活  22-23
  4.2 ACC内ERK1/2激活参与调节乙酸诱导的小鼠的焦虑样行为  23-24
  4.3 ACC内ERK1/2激活不影响乙酸诱导的内脏疼痛反应  24
  4.4 乙酸诱导的小鼠内脏痛中痛的感觉和情感层面表现出分离  24-26
5 结论  26-27
参考文献  27-33
综述  33-54
  参考文献  44-54
攻读学位期间主要的研究成果目录  54-56
致谢  56

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