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基于CD20启动子驱动stTRAIL特异性表达的B-淋巴瘤基因治疗的研究
作 者: 袁向飞
导 师: 王劲峰
学 校: 天津大学
专 业: 应用化学
关键词: TRAIL 基因治疗 特异性启动子 淋巴瘤 CD20 腺病毒载体
分类号: R733.1
类 型: 博士论文
年 份: 2012年
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内容摘要
CD20是B淋巴细胞表面的特异性标志,90%以上的非霍奇金淋巴瘤(NHL)都来源于B淋巴细胞,具有B淋巴细胞的表型,因而CD20分子成为治疗B-NHL的重要靶点。除了能够特异性靶向CD20的单克隆抗体之外,CD20启动子也拥有在B淋巴细胞中特异的活性,因而CD20启动子有望用于在转录水平特异性调控治疗蛋白的表达,对B-NHL进行杀伤的基因治疗。TRAIL是目前唯一一个已知的对肿瘤细胞有选择性杀伤作用的细胞因子,腺病毒载体介导的TRAIL基因治疗还具有旁观者效应的优点。本研究根据上述种种,以CD20启动子为转录水平的靶向;以stTRAIL为功能性治疗蛋白;以腺病毒为介导载体,旨在探索出一种针对B淋巴肿瘤具有特异性杀伤效果的基因治疗方案,来丰富现有的治疗手段我们首先从CD20阳性的BJAB细胞系的基因组DNA中克隆了一个447bp的CD20启动子片断,并鉴定了这个启动子片断具有在B淋巴肿瘤细胞内的特异转录活性;随后又人工合成了含有分泌信号-异亮氨酸拉链-sTRAIL(aa114-aa281)的stTRAIL基因,该基因表达产物中的异亮氨酸拉链有助于促使sTRAIL形成具有生物学功能的同源三聚体结构;最后将CD20启动子片断-stTRAIL基因-真核poly(A)序列一整个转录单元装入腺病毒载体系统AdEasy中,包装出携带P20-stTRAIL序列的腺病毒。我们证明了在用AdP20-stTRAIL分别感染CD20阳性和阴性的细胞系之后,只有在CD20阳性的BJAB细胞中,才能在mRNA和蛋白两个水平都检测到stTRAIL的表达,在CD20阴性的细胞系中则完全检测不到。同时在AdP20-stTRAIL感染的BJAB细胞培养上清中也检测到stTRAIL蛋白,证明这个产物能够分泌到细胞外。在接下来的体外功能性实验中,我们发现BJAB细胞在被AdP20-stTRAIL感染之后自身生长受到抑制,并且发生了明显的凋亡现象。在对皮下接种了BJAB细胞的移植瘤小鼠模型的治疗实验中,原位注射了AdP20-stTRAIL的肿瘤生长受到了明显抑制。这些都进一步证明了这种腺病毒介导的CD20特异启动子操控的stTRAIL基因表达的基因治疗策略,在将来有望用于对B-NHL的治疗。
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全文目录
中文摘要 3-4 ABSTRACT 4-7 第一章 绪论 7-12 1.1 基因治疗概述 7 1.2 肿瘤靶向治疗 7-8 1.3 特异性启动子 8-9 1.4 用于转录靶向的启动子 9-10 1.5 小结 10-12 第二章 CD20 启动子的特异性鉴定 12-32 2.1 导言 12-14 2.2 实验设备与材料 14-16 2.3 实验方法 16-23 2.4 实验结果 23-27 2.5 讨论 27-30 2.6 小结 30-32 第三章 携带 P20-stTRAIL 基因的腺病毒载体的制备 32-79 3.1 导言 32-38 3.2 实验设备与材料 38-41 3.3 实验方法 41-59 3.4 实验结果 59-71 3.5 讨论 71-78 3.6 小结 78-79 第四章 AdP20-stTRAIL 的体内外抗肿瘤功能 79-106 4.1 导言 79-86 4.2 实验设备与材料 86-89 4.3 实验方法 89-95 4.4 实验结果 95-101 4.5 讨论 101-105 4.6 小结 105-106 第五章 总结与展望 106-109 参考文献 109-116 发表论文和参加科研情况说明 116-117 致谢 117
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 网状内皮系统肿瘤
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