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基于人乳头瘤病毒16型L2的新型宫颈癌预防性疫苗研究

作　者: 郭艳涛
导　师: 周玉柏
学　校: 北京工业大学
专　业: 生物物理学
关键词: HPV16L2 PTD 重组腺病毒 宫颈癌 疫苗
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 24次
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内容摘要


宫颈癌是发病率仅次于乳腺癌的第二大妇科恶性肿瘤。目前的治疗措施主要是根据癌症分期选择进行手术及放化疗，但治疗费用高，易复发。大量流行病学数据表明，高危型人乳头瘤病毒（Humanpapillomavirus，HPV）与宫颈癌的发生密切关系，是导致宫颈癌的主要病因。因此，通过研发疫苗预防HPV的早期感染可能是目前降低宫颈癌发病率较为经济有效的策略。目前，在欧美上市的的宫颈癌预防性疫苗是基于HPV主要衣壳蛋白L1的病毒样颗粒（Virus-LikeParticles，VLPs）亚单位疫苗，可诱导机体产生型别特异性的中和抗体，不同型别之间鲜有交叉保护，但若通过增加价位来扩大疫苗保护范围则又会增加疫苗的安全风险。近来的研究发现，HPV次要衣壳蛋白L2的N端区域含有保守的共同表位，能够诱导产生具有交叉保护效力的中和抗体，是很有前景的新一代宫颈癌预防性疫苗。然而，HPVL2N段多肽免疫原性普遍偏低，这制约了该疫苗的进一步应用。本课题将蛋白转导域多肽（Proteintransductiondomain，PTD）作为多肽佐剂与不同的HPV16L2N端多肽片段以融合或混合的方式结合构建了一系列重组蛋白疫苗；同时，我们还构建了表达HPV16L2N段或全长蛋白的重组腺病毒疫苗，并通过动物实验对重组蛋白疫苗和重组腺病毒疫苗的免疫效果进行了系统评价。结果如下：（1）间接ELISA结果显示，各重组蛋白疫苗均可诱导产生特异性抗体，抗体滴度与疫苗抗原大小呈正相关。（2）假病毒颗粒中和实验显示，PTD与HPV16L2N端多肽构成的融合蛋白可以诱导产生较高滴度的交叉中和抗体，且可明显提高中和抗体在总抗体中的比例。（3）含HPV16L2全长基因的重组腺病毒既可诱导产生具有交叉保护效力的中和抗体，又可刺激产生特异性细胞免疫应答。综上，融合表达PTD可显著提高L2N段多肽的免疫原性，其体液免疫增强效果与疫苗抗原大小呈正相关。L2重组腺病毒疫苗可刺激较好的细胞免疫应答，两种形式的疫苗结合使用将可提供更全面的保护效力。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-6
主要英文缩写词  6-9
第1章 绪论  9-15
  1.1 HPV16L2及其研究现状  9-11
    1.1.1 HPV与宫颈癌  9-10
    1.1.2 基于L2的疫苗研究进展  10-11
    1.1.3 方向和展望  11
  1.2 蛋白转导域（PTD）的研究进展  11-12
  1.3 本课题研究内容  12-13
  1.4 本课题技术路线  13-15
第2章 HPV16L2重组蛋白疫苗的构建  15-25
  2.1 实验材料  15-16
    2.1.1 质粒和菌株  15
    2.1.2 工具酶及主要试剂  15
    2.1.3 主要仪器设备  15-16
    2.1.4 引物  16
  2.2 实验方法  16-20
    2.2.1 重组HPV16L2蛋白构建  16-18
    2.2.2 重组HPV16L2蛋白表达  18-19
    2.2.3 重组HPV16L2蛋白纯化  19-20
  2.3 实验结果和讨论  20-24
    2.3.1 PCR扩增重组HPV16L2基因片段的结果  20
    2.3.2 重组HPV16L2质粒的酶切鉴定和测序结果  20
    2.3.3 重组HPV16L2蛋白表达条件优化结果  20-22
    2.3.4 重组HPV16L2蛋白纯化结果  22-24
  2.4 本章小结  24-25
第3章 含HPV16L2h基因的重组腺病毒疫苗的构建  25-35
  3.1 实验材料  25-26
    3.1.1 质粒、细胞和菌株  25
    3.1.2 工具酶及主要试剂  25
    3.1.3 主要仪器设备  25-26
    3.1.4 引物  26
  3.2 实验方法  26-30
    3.2.1 重组穿梭质粒pDC316的构建  26-28
    3.2.2 重组腺病毒的包装  28-29
    3.2.3 重组腺病毒的鉴定  29
    3.2.4 重组腺病毒疫苗的大量扩增和纯化  29-30
    3.2.5 重组腺病毒的滴度测定  30
  3.3 实验结果和讨论  30-34
    3.3.1 PCR扩增HPV16L2h基因片段的结果  30
    3.3.2 重组质粒pDC316的酶切鉴定结果  30-31
    3.3.3 重组腺病毒的HPV16L2h基因和复制缺陷型的鉴定  31-33
    3.3.4 重组腺病毒表达HPV16L2h相关蛋白水平的检测  33
    3.3.5 重组腺病毒的滴度测定结果  33-34
  3.4 本章小结  34-35
第4章 重组蛋白疫苗和重组腺病毒疫苗免疫效果的研究  35-47
  4.1 实验材料  35-36
    4.1.1 细胞和疫苗  35
    4.1.2 主要试剂  35
    4.1.3 主要仪器设备  35-36
    4.1.4 实验动物  36
  4.2 实验方法  36-40
    4.2.1 免疫小鼠  36-37
    4.2.2 ELISA和假病毒中和滴定检测体液免疫  37-38
    4.2.3 ELISPOT检测细胞免疫反应  38-40
  4.3 实验结果和讨论  40-45
    4.3.1 体液免疫结果  40-43
    4.3.2 T细胞表位肽预测结果  43
    4.3.3 细胞免疫结果  43-45
  4.4 本章小结  45-47
结论  47-49
参考文献  49-53
攻读硕士学位期间所申请的发明专利  53-55
致谢  55

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 子宫肿瘤
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