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白香丹胶囊对肝气逆证大鼠海马GABA_B受体表达及其G蛋白偶联的离子通道和信号通路的影响
作 者: 蔡洪信
导 师: 张惠云
学 校: 山东中医药大学
专 业: 中药学
关键词: 白香丹胶囊 肝气逆证 γ-氨基丁酸B受体 内向整流性钾通道 细胞外信号调节蛋白激酶 cAMP反应元件结合蛋白 神经肽Y
分类号: R285.5
类 型: 博士论文
年 份: 2012年
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内容摘要
目的:检测肝气逆证模型大鼠海马GABABR1、GABABR2、AC、KIR3.2、pERK1/2、ERK1/2、pCREB、CREB、BDNF、NPY表达的变化,探讨调肝方药白香丹胶囊对肝气逆证的部分中枢干预机制。方法:大鼠随机分为正常组、模型组、白香丹胶囊组(0.2g.kg-1)、巴氯芬组(0.008g.kg-1),采用“社会隔离结合居住入侵”方法制备肝气逆证大鼠模型,药物组按相应剂量灌胃给药7天,每日1次。通过糖水偏好实验、旷场实验和高架十字迷宫实验进行模型评价,采用免疫荧光技术检测各组大鼠海马GABABR1、GABABR2和AC、KIR3.2、BDNF、NPY的表达与分布,Western blot检测各组大鼠海马GABABR1、GABABR2、AC、KIR3.2、pERK1/2、ERK1/2、pCREB、CREB、BDNF、NPY蛋白表达变化。结果:居住入侵后,与正常组比较,模型组体重降低(P<0.05),糖水偏好系数降低(P<0.05),旷场实验得分增高(P<0.05),高架十字迷宫实验HD、OE+CE、RE值增高(P<0.05),OE%和OT%降低(P<0.05),海马GABABR1、GABABR2、AC、KIR3.2、pERK1/2、pCREB、BDNF、NPY表达均降低(P<0.05),ERK、CREB蛋白表达无差异(P>0.05)。与模型组比较,白香丹胶囊组体重和糖水偏好系数增高(P<0.05),巴氯芬组体重和糖水偏好系数无差异(P>0.05);与模型组比较,白香丹胶囊组和巴氯芬组旷场实验得分降低(P<0.05)、HD、OE+CE和RE值降低(P<0.05),OE%和OT%升高(P<0.05),海马GABABR1、GABABR2、AC、KIR3.2、pERK1/2、pCREB、BDNF、NPY表达均升高(P<0.05),ERK、CREB表达无差异(P>0.05)。结论:肝疏泄失常导致肝气逆证的微观机制与海马GABAB受体G蛋白偶联的离子通道功能和信号通路传导紊乱有关,改善海马GABAB受体G蛋白偶联的离子通道功能和信号通路传导紊乱可能是白香丹胶囊平肝理气的分子生物学机制之一。
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全文目录
提要 3-4 Abstract 4-10 引言 10-14 材料与方法 14-30 1 材料 14-19 1.1 实验动物 14 1.2 药品及试剂 14-15 1.3 仪器设备 15 1.4 相关试剂的配制 15-19 1.4.1 0.1mol/L PH 7.4 PB 缓冲液的配制 15 1.4.2 0.01mol/L PH 7.5 PBS 缓冲液的配制 15 1.4.3 4%多聚甲醛固定液的配制 15 1.4.4 0.01mol/L PH 6.0 柠檬酸缓冲液的配制 15 1.4.5 Western blot 存储液的配制 15-16 1.4.6 Western blot 使用液的配制 16-19 2 方法 19-30 2.1 大鼠分组、造模及给药 19-20 2.2 行为学评价 20-22 2.2.1 打斗情况观察 20 2.2.2 旷场实验 20-21 2.2.3 糖水偏好实验 21 2.2.4 高架十字迷宫实验 21-22 2.3 脑组织留取 22 2.4 石蜡切片制备 22-23 2.4.1 洗涤 22 2.4.2 脱水 22 2.4.3 透明 22-23 2.4.4 浸蜡 23 2.4.5 包埋 23 2.4.6 切片 23 2.5 免疫荧光化学反应 23-24 2.5.1 石蜡切片脱蜡至水 23 2.5.2 微波热抗原修复 23-24 2.5.3 封闭 24 2.5.4 一抗孵育 24 2.5.5 二抗孵育 24 2.5.6 封片 24 2.5.7 免疫荧光检测 24 2.6 蛋白的提取和测定 24-26 2.6.1 蛋白的提取 24-25 2.6.2 样品蛋白含量的测定 25-26 2.6.2.1 制作标准曲线 25 2.6.2.2 检测样品蛋白含量 25-26 2.7 蛋白免疫印记(Western bolt) 26-29 2.7.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) 26-27 2.7.2 转膜 27-28 2.7.3 杂交反应 28 2.7.4 显影与图像分析 28-29 2.8 统计方法 29-30 结果 30-38 1 一般情况和行为学观察 30-32 1.1 各组大鼠一般情况和打斗情况观察 30 1.2 各组大鼠的体重变化 30 1.3 各组大鼠旷场实验结果比较 30-31 1.4 各组大鼠糖水偏好实验结果比较 31 1.5 各组大鼠高架十字迷宫实验结果比较 31-32 2 免疫荧光结果 32-34 2.1 各组大鼠海马 GABABR1、GABABR2 的表达与分布 32-33 2.2 各组大鼠海马 KIR3.2 的表达与分布 33 2.3 各组大鼠海马 AC 的表达与分布 33-34 2.4 各组大鼠海马 BDNF 的表达与分布 34 2.5 各组大鼠海马 NPY 的表达与分布 34 3 Western blot 结果 34-38 3.1 各组大鼠海马 GABABR1、GABABR2、KIR3.2、AC 的表达 34-35 3.2 各组大鼠海马 pERK1/2、ERK1/2、pCREB、CREB 的表达 35-36 3.3 各组大鼠海马 BDNF、NPY 的表达 36-38 讨论 38-51 1 情志病证的概述 38-39 2 怒所致情志病证 39 3 肝气逆证大鼠模型的造模及评价 39-41 4 白香丹胶囊对肝气逆证的调节作用 41 5 GABAB 受体 G 蛋白偶联的离子通道和信号通路在应激过程中的作用 41-48 5.1 GABAB 受体和 G 蛋白的结构 41-42 5.2 GABAB 受体 G 蛋白偶联的离子通道 42-43 5.3 GABAB 受体 G 蛋白偶联的信号通路 43-48 5.3.1 AC 43-44 5.3.2 ERK1/2 44 5.3.3 CREB 44-45 5.3.4 BDNF 45-46 5.3.5 NPY 46-48 6 巴氯芬与白香丹胶囊对肝气逆证干预效果比较 48-50 7 问题与展望 50-51 结语 51-52 参考文献 52-59 附录 59-68 缩略词表 68-69 致谢 69-70 查新报告 70-81 论文著作 81-93 科研课题 93-99 详细摘要 99-106
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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