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番茄红素对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

作　者: 颜林淋
导　师: 刘厂辉
学　校: 南华大学
专　业: 内科学
关键词: 番茄红素 TNF-α 人脐静脉内皮细胞 NF-κB
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 2次
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内容摘要

目的：观察番茄红素对肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)损伤模型，基质金属蛋白酶（metalloproteases，MMP）-9的表达的抑制作用，进一步探讨该药的药理作用，为该药的临床应用提供可靠的实验依据。方法：体外培养HUVEC，并根据不同的实验目的分为5组：（1）空白对照组（A组）；（2）TNF-α组（B组，加入终浓度为50ng/mL TNF-α作用24h）；（3）番茄红素低剂量组（B组：HUVEC细胞经1μmol/L番茄红素预处理1h后，加入50ng/mL的TNF-α孵育24h）；（4）番茄红素中剂量组（C组：TNF-α+5μmol/L番茄红素）；（5）番茄红素高剂量组（D组：TNF-α+10μmol/L番茄红素）。孵育结束后，WST-1法检测HUVEC细胞增殖情况，ELISA检测MMP-9产生，明胶酶谱实验检测MMP-9的活性改变情况。分别提取核蛋白和胞浆蛋白，Western blot检测（蛋白质印迹法）NF-κB p65核转位，以及胞浆磷酸化I-κB的水平改变情况。结果：（1）0～10μmol/L番茄红素对细胞无明显毒性作用。当其浓度为15μmol/L时，细胞活性降低了7%；（2）50ng/mL TNF-α作用24h后，对HUVEC生长抑制率为32%，而1，5，10μmol/L番茄红素预处理HUVEC后，生长抑制率分别降至20.4%，14.6%和4.51%；（3）TNF-α诱导HUVEC后，MMP-9浓度为（1.17±0.24）ng/ml，1，5，10μmol/L番茄红素能以剂量依赖性方式抑制TNF-α诱导的MMP-9产生，并能抑制其活性；（4）正常对照组细胞核内几乎未检测到NF-κB的活性亚基p65；TNF-α处理24h后，核内p65亚基显著增多。不同浓度番茄红素处理后，细胞核内p65亚基含量随着浓度的增高而降低；（5）HUVEC在静息状态下，胞浆内I-κB磷酸化水平很低。TNF-α诱导后，I-κB磷酸化水平迅速增高。番茄红素预处理能有效抑制I-κB的降解。结论：（1）番茄红素能抑制TNF-α诱导的HUVEC细胞表达MMP-9；（2）番茄红素抑制MMP-9的产生可能与抑制NF-κB的激活有关。

全文目录

主要中英文缩写  4-5
摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-12
实验材料  12-15
实验方法及步骤  15-24
结果  24-28
讨论  28-31
结论  31-32
参考文献  32-35
综述  35-40
  参考文献  38-40
攻读硕士学位期间发表的论文  40-41
致谢  41

番茄红素对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

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