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黄芩素对MRSA抑菌活性及其机制的初步研究

作 者: 云宝仪
导 师: 谢明杰
学 校: 辽宁师范大学
专 业: 微生物学
关键词: 黄芩素 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 抑菌活性 抑菌机制
分类号: R285
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 35次
引 用: 0次
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内容摘要


黄芩素(baicalein)作为黄芩中的一种黄酮类化合物,具有广泛的生物活性和药理作用,如抗菌、抗癌、抗病毒、保肝、利尿、清除自由基等生物功能。目前关于黄芩素的抑菌活性报道较多,但关于黄芩素的抑菌机理尚不十分明确。本文以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为供试菌,通过研究黄芩素对MRSA的抑菌活性、细胞膜通透性、蛋白质含量、对DNA拓扑异构酶的影响、药物与DNA的结合方式以及其对限制性内切酶的影响等方面,来系统阐述黄芩素的抑菌活性和抑菌作用机制。结果如下:(1)本文通过牛津杯法和TTC染色法对黄芩素的抑菌活性进行研究,实验结果显示黄芩素对MRSA的抑菌活性较为显著,其最低抑菌浓度为0.04mg/mL。(2)通过扫描电镜、检测细胞内电导率和大分子物质(DNA和RNA)等实验来测定细胞膜的渗透性,实验结果显示黄芩素只能微小改变细胞膜的渗透性,并未破坏细胞膜及细胞壁的完整性。(3)通过SDS-PAGE进行蛋白谱带分析,实验结果表明黄芩素对MRSA菌体蛋白质的合成有明显的抑制作用,在16h时加药组比对照组降低了44.62%。(4)通过琼脂糖凝胶电泳法来研究黄芩素对MRSA拓扑异构酶的活性影响。实验结果表明黄芩素能够抑制DNA拓扑异构酶的活性,当其浓度为0.05mg/mL时能够抑制拓扑异构酶I和II的活性,浓度为0.2mg/mL时可完全抑制拓扑异构酶I和II的活性。(5)通过琼脂糖凝胶电泳法和紫外可见光光谱法测定了黄芩素与DNA的作用方式,结果出现减色效应和红移现象,实验说明黄芩素抑制拓扑异构酶的活性是通过与DNA结合导致的,并且发生的是嵌入结合作用。(6)通过限制性内切酶电泳图谱检测黄芩素与DNA的结合位点,结果显示黄芩素与DNA作用后,Taq酶的酶切图谱发生改变,说明黄芩素的结合位点可能是在DNA的T与CGA之间的碱基位置。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
引言  9-11
1 文献综述  11-16
  1.1 黄芩素的生物活性  11-14
    1.1.1 黄芩素的来源及分布  11
    1.1.2 黄芩素的结构及理化性质  11-12
    1.1.3 黄芩素的生物活性  12-14
  1.2 本文研究目的和意义  14-15
  1.3 本文主要内容  15-16
2 黄芩素对 MRSA 的抑菌活性研究  16-26
  2.1 实验材料  16-18
    2.1.1 菌株来源  16
    2.1.2 实验药品  16
    2.1.3 培养基  16-17
    2.1.4 主要实验器材  17-18
  2.2 实验方法  18-21
    2.2.1 MRSA 的鉴定方法  18-20
      2.2.1.1 制备 MHA 平板  18
      2.2.1.2 纸片扩散法鉴定 MRSA  18
      2.2.1.3 MecA 基因的检测方法  18-20
    2.2.2 黄芩素等六种单体对 MRSA 抑菌活性的测定方法  20
    2.2.3 黄芩素最低抑菌浓度 (MIC 值) 测定方法  20-21
    2.2.4 黄芩素对 MRSA 生长曲线抑制作用的测定  21
  2.3 结果  21-24
    2.3.1 MRSA 鉴定实验结果  21-22
      2.3.1.1 纸片扩散法鉴定 MRSA 的实验结果  21-22
      2.3.1.2 MecA 基因的检测结果  22
    2.3.2 黄芩素等六种单体化合物的抑菌结果  22-23
    2.3.3 黄芩素对 MRSA 最低抑菌浓度 (MIC)的测定结果  23
    2.3.4 黄芩素对 MRSA 生长曲线的抑制作用结果  23-24
  2.4 小结  24-26
3 黄芩素对 MRSA 抑菌作用机制研究  26-44
  3.1 实验材料  26-27
    2.1.1 供试菌株  26
    3.1.2 培养基  26
    3.1.3 主要试剂  26
    3.1.4 实验仪器  26-27
  3.2 实验方法  27-32
    3.2.1 黄芩素对 MRSA 细胞膜通透性影响的测定方法  27-28
      3.2.1.1 黄芩素对 MRSA 菌体培养液电导率的测定  27
      3.2.1.2 黄芩素对 MRSA 培养液大分子物质的测定  27-28
      3.2.1.3 扫描电镜样品制备  28
    3.2.2 黄芩素对 MRSA 可溶性蛋白含量的测定方法  28-30
      3.2.2.1 制备可溶性蛋白样品  28
      3.2.2.2 SDS-PAGE 电泳体系主要试剂的配制  28-29
      3.2.2.3 SDS-PAGE 电泳实验流程  29-30
    3.2.3 黄芩素对 MRSA 拓扑异构酶活性的测定方法  30-31
      3.2.3.1 DNA 拓扑异构酶的提取方法  30
      3.2.3.2 DNA 拓扑异构酶活性的测定  30-31
      3.2.3.3 黄芩素对 DNA 拓扑异构酶 I 活性影响的测定方法  31
      3.2.3.4 黄芩素对 DNA 拓扑异构酶 II 活性影响的测定方法  31
    3.2.4 黄芩素与 DNA 作用方式研究  31-32
      3.2.4.1 琼脂糖凝胶电泳法测定黄芩素与 DNA 的作用方式  31-32
      3.2.4.2 紫外吸收光谱法测定黄芩素与 DNA 的作用方式  32
      3.2.4.3 黄芩素对 DNA 限制性内切酶的影响测定  32
      3.2.4.4 数据的分析和处理  32
  3.3 结果  32-41
    3.3.1 黄芩素对 MRSA 细胞膜的影响  32-35
      3.3.1.1 黄芩素作用 MRSA 后培养液中电导率的变化结果  32-33
      3.3.1.2 黄芩素对 MRSA 培养液中大分子物质的影响结果  33-34
      3.3.1.3 黄芩素对 MRSA 菌体形态的影响  34-35
    3.3.2 黄芩素对 MRSA 可溶性蛋白的影响  35-36
    3.3.3 黄芩素对 MRSA DNA 拓扑异构酶活性的影响  36-39
      3.3.3.1 粗酶提取液中 DNA 拓扑异构酶活性的测定  37
      3.3.3.2 黄芩素对 MRSA TOPOⅠ活性的影响  37-38
      3.3.3.3 黄芩素对 MRSA TOPOⅡ的活性影响  38-39
    3.3.4 黄芩素与 DNA 作用方式研究  39-41
      3.3.4.1 黄芩素对 DNA 的直接作用结果  39
      3.3.4.2 黄芩素与 DNA 结合的紫外光谱研究  39-40
      3.3.4.3 黄芩素对限制性内切酶的影响  40-41
  3.4 讨论  41-44
4 结论与展望  44-46
  4.1 结论  44-45
  4.2 展望  45-46
参考文献  46-52
研究生期间学术论文发表情况  52-53
致谢  53

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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