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黄芩素对MRSA抑菌活性及其机制的初步研究
作 者: 云宝仪
导 师: 谢明杰
学 校: 辽宁师范大学
专 业: 微生物学
关键词: 黄芩素 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 抑菌活性 抑菌机制
分类号: R285
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
黄芩素(baicalein)作为黄芩中的一种黄酮类化合物,具有广泛的生物活性和药理作用,如抗菌、抗癌、抗病毒、保肝、利尿、清除自由基等生物功能。目前关于黄芩素的抑菌活性报道较多,但关于黄芩素的抑菌机理尚不十分明确。本文以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为供试菌,通过研究黄芩素对MRSA的抑菌活性、细胞膜通透性、蛋白质含量、对DNA拓扑异构酶的影响、药物与DNA的结合方式以及其对限制性内切酶的影响等方面,来系统阐述黄芩素的抑菌活性和抑菌作用机制。结果如下:(1)本文通过牛津杯法和TTC染色法对黄芩素的抑菌活性进行研究,实验结果显示黄芩素对MRSA的抑菌活性较为显著,其最低抑菌浓度为0.04mg/mL。(2)通过扫描电镜、检测细胞内电导率和大分子物质(DNA和RNA)等实验来测定细胞膜的渗透性,实验结果显示黄芩素只能微小改变细胞膜的渗透性,并未破坏细胞膜及细胞壁的完整性。(3)通过SDS-PAGE进行蛋白谱带分析,实验结果表明黄芩素对MRSA菌体蛋白质的合成有明显的抑制作用,在16h时加药组比对照组降低了44.62%。(4)通过琼脂糖凝胶电泳法来研究黄芩素对MRSA拓扑异构酶的活性影响。实验结果表明黄芩素能够抑制DNA拓扑异构酶的活性,当其浓度为0.05mg/mL时能够抑制拓扑异构酶I和II的活性,浓度为0.2mg/mL时可完全抑制拓扑异构酶I和II的活性。(5)通过琼脂糖凝胶电泳法和紫外可见光光谱法测定了黄芩素与DNA的作用方式,结果出现减色效应和红移现象,实验说明黄芩素抑制拓扑异构酶的活性是通过与DNA结合导致的,并且发生的是嵌入结合作用。(6)通过限制性内切酶电泳图谱检测黄芩素与DNA的结合位点,结果显示黄芩素与DNA作用后,Taq酶的酶切图谱发生改变,说明黄芩素的结合位点可能是在DNA的T与CGA之间的碱基位置。
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全文目录
摘要 4-5 Abstract 5-9 引言 9-11 1 文献综述 11-16 1.1 黄芩素的生物活性 11-14 1.1.1 黄芩素的来源及分布 11 1.1.2 黄芩素的结构及理化性质 11-12 1.1.3 黄芩素的生物活性 12-14 1.2 本文研究目的和意义 14-15 1.3 本文主要内容 15-16 2 黄芩素对 MRSA 的抑菌活性研究 16-26 2.1 实验材料 16-18 2.1.1 菌株来源 16 2.1.2 实验药品 16 2.1.3 培养基 16-17 2.1.4 主要实验器材 17-18 2.2 实验方法 18-21 2.2.1 MRSA 的鉴定方法 18-20 2.2.1.1 制备 MHA 平板 18 2.2.1.2 纸片扩散法鉴定 MRSA 18 2.2.1.3 MecA 基因的检测方法 18-20 2.2.2 黄芩素等六种单体对 MRSA 抑菌活性的测定方法 20 2.2.3 黄芩素最低抑菌浓度 (MIC 值) 测定方法 20-21 2.2.4 黄芩素对 MRSA 生长曲线抑制作用的测定 21 2.3 结果 21-24 2.3.1 MRSA 鉴定实验结果 21-22 2.3.1.1 纸片扩散法鉴定 MRSA 的实验结果 21-22 2.3.1.2 MecA 基因的检测结果 22 2.3.2 黄芩素等六种单体化合物的抑菌结果 22-23 2.3.3 黄芩素对 MRSA 最低抑菌浓度 (MIC)的测定结果 23 2.3.4 黄芩素对 MRSA 生长曲线的抑制作用结果 23-24 2.4 小结 24-26 3 黄芩素对 MRSA 抑菌作用机制研究 26-44 3.1 实验材料 26-27 2.1.1 供试菌株 26 3.1.2 培养基 26 3.1.3 主要试剂 26 3.1.4 实验仪器 26-27 3.2 实验方法 27-32 3.2.1 黄芩素对 MRSA 细胞膜通透性影响的测定方法 27-28 3.2.1.1 黄芩素对 MRSA 菌体培养液电导率的测定 27 3.2.1.2 黄芩素对 MRSA 培养液大分子物质的测定 27-28 3.2.1.3 扫描电镜样品制备 28 3.2.2 黄芩素对 MRSA 可溶性蛋白含量的测定方法 28-30 3.2.2.1 制备可溶性蛋白样品 28 3.2.2.2 SDS-PAGE 电泳体系主要试剂的配制 28-29 3.2.2.3 SDS-PAGE 电泳实验流程 29-30 3.2.3 黄芩素对 MRSA 拓扑异构酶活性的测定方法 30-31 3.2.3.1 DNA 拓扑异构酶的提取方法 30 3.2.3.2 DNA 拓扑异构酶活性的测定 30-31 3.2.3.3 黄芩素对 DNA 拓扑异构酶 I 活性影响的测定方法 31 3.2.3.4 黄芩素对 DNA 拓扑异构酶 II 活性影响的测定方法 31 3.2.4 黄芩素与 DNA 作用方式研究 31-32 3.2.4.1 琼脂糖凝胶电泳法测定黄芩素与 DNA 的作用方式 31-32 3.2.4.2 紫外吸收光谱法测定黄芩素与 DNA 的作用方式 32 3.2.4.3 黄芩素对 DNA 限制性内切酶的影响测定 32 3.2.4.4 数据的分析和处理 32 3.3 结果 32-41 3.3.1 黄芩素对 MRSA 细胞膜的影响 32-35 3.3.1.1 黄芩素作用 MRSA 后培养液中电导率的变化结果 32-33 3.3.1.2 黄芩素对 MRSA 培养液中大分子物质的影响结果 33-34 3.3.1.3 黄芩素对 MRSA 菌体形态的影响 34-35 3.3.2 黄芩素对 MRSA 可溶性蛋白的影响 35-36 3.3.3 黄芩素对 MRSA DNA 拓扑异构酶活性的影响 36-39 3.3.3.1 粗酶提取液中 DNA 拓扑异构酶活性的测定 37 3.3.3.2 黄芩素对 MRSA TOPOⅠ活性的影响 37-38 3.3.3.3 黄芩素对 MRSA TOPOⅡ的活性影响 38-39 3.3.4 黄芩素与 DNA 作用方式研究 39-41 3.3.4.1 黄芩素对 DNA 的直接作用结果 39 3.3.4.2 黄芩素与 DNA 结合的紫外光谱研究 39-40 3.3.4.3 黄芩素对限制性内切酶的影响 40-41 3.4 讨论 41-44 4 结论与展望 44-46 4.1 结论 44-45 4.2 展望 45-46 参考文献 46-52 研究生期间学术论文发表情况 52-53 致谢 53
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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