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芩术四物汤治疗原发性痛经的药效物质基础研究

作　者: 袁海梅
导　师: 凌智群
学　校: 成都中医药大学
专　业: 药物分析学
关键词: 芩术四物汤原发性痛经复方黄酮类化合物水煎液药效物质基础
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

本文由四部分组成,第一部分芩术四物汤有效部位的筛选；第二部分对芩术四物汤主要有效部位的化学成分进行研究；第三部分对分离得到的部分化合物进行来源归属以及单味药化学成分分析；第四部分是测定不同配伍水煎液中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量。第一部分采用有机溶剂对芩术四物汤水煎液进行系统萃取分离,将芩术四物汤水煎液分为乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位及水煎液萃余液,用缩宫素所致小鼠痛经模型进行药效部位筛选研究。研究结果表明,芩术四物汤乙酸乙酯部位在0.23g/kg、0.12g/kg剂量下,正丁醇部位在1.04g/kg剂量下均能明显减少催产素所致痛经小鼠扭体反应次数(P<0.05或P<0.01)。通过筛选比较并初步确定了芩术四物汤乙酸乙酯部位为治疗原发性痛经最好的药效部位。第二部分采用硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱进行分离、纯化,结合理化性质和波谱方法对所分离得到的单体化合物进行结构鉴定,从芩术四物汤乙酸乙酯萃取部位中分离了17个化合物,鉴别了16个化合物。分别为棕榈酸甘油酯,2(S)-5,7-二羟基-6-甲氧基二氢黄酮,β-谷甾醇,5,7-二羟基-8-甲氧基黄酮,白杨素,苯甲酸,白术内酯-Ⅲ,5,6’-二羟基-6,7,8,2’-四甲氧基黄酮,反式阿魏酸,7-羟基-4’-甲氧基异黄酮,黄芩苷元,5,7,3’,6’-四羟基-8,2’-二甲氧基黄酮,3,5,7,2’,6’-五羟基二氢黄酮,5,7,2’,6’-四羟基黄酮,没食子酸,汉黄芩素-5-O-β-D-吡喃葡糖苷。以上化合物均首次从芩术四物汤水煎液中分离得到。初步药效学表明黄芩素和汉黄芩素为治疗原发性痛经的药效物质基础。第三部分对分离得到的化合物进行来源归属以及单味药成分分析。采用RP-HPLC法对复方进行化学成分分析,证实了黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素为芩术四物汤中的主要成分。芩术四物汤中主要化学成分为黄酮类化合物,来源于君药黄芩。第四部分是采用RP-HPLC法测定不同配伍水煎液中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量。复方配伍后黄芩苷含量最低的是缺白芍组,含量为40.01±0.03mg/g；最高的为黄芩与臣药和使药配伍,含量为56.48±0.10mg/g；复方中的含量为42.46±0.04mg/g,分布偏低。复方配伍后黄芩素含量最低的是缺白术组,含量为8.87±0.07mg/g：最高的为君药与川芎配伍,含量为16.224±0.04mg/g；复方中的含量为9.97±0.09mg/g,分布偏低。复方配伍后汉黄芩素含量最低的是缺白芍组,含量为2.48±0.06mg/g；最高的为君药与佐药配伍,含量为4.48±0.09mg/g；复方中的含量为3.08-0.03mg/g,分布偏低。本实验建立的HPLC法准确、可靠,可同时测定芩术四物汤中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量；复方与单味药黄芩相比,复方中的3种黄酮类成分含量均降低；与配伍组方相比,复方中3种成分含量处于中间水平。芩术四物汤中黄芩苷,黄芩素,汉黄芩素的煎出量下降,说明复方芩术四物汤能补血行血行气利湿同时也制约黄芩白芍苦寒之性起到相反相成之效。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
引言  8-10
第一章芩术四物汤有效部位筛选  10-13
  1 引言  10
  2 实验部分  10-12
    2.1 材料与方法  10-11
      2.1.1 药物  10
      2.1.2 试剂  10-11
      2.1.3 动物  11
      2.1.4 统计学方法  11
    2.2 方法与结果  11-12
  3 小结和讨论  12-13
第二章芩术四物汤主要有效部位化学成分研究  13-30
  1 引言  13
  2 实验部分  13-28
    2.1 材料与方法  13-14
      2.1.1 仪器  13
      2.1.2 材料  13-14
      2.1.3 药材  14
    2.2 提取与分离  14-19
    2.3 结构鉴定  19-28
  3 小结和讨论  28-30
第三章分离化合物来源以及单味药化学成分分析  30-37
  1 引言  30
  2 实验部分  30-35
    2.1 材料与方法  30-31
      2.1.1 仪器  30
      2.1.2 材料  30-31
      2.1.3 药材  31
      2.1.4 色谱条件  31
      2.1.5 供试品溶液的制备  31
    2.2 实验结果  31-35
      2.2.1 色谱条件优化  31-34
        2.2.1.1 流动相系统的选择  31-32
        2.2.1.2 洗脱方式的选择  32-33
        2.2.1.3 检测波长的选择  33-34
      2.2.2 单体和单味药化学成分分析  34-35
  3 小结与结论  35-37
第四章测定配伍水煎液中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量  37-52
  1 引言  37
  2 实验部分  37-50
    2.1 材料与方法  37-38
      2.1.1 仪器  37
      2.1.2 材料  37
      2.1.3 药材  37
      2.1.4 色谱条件  37
      2.1.5 样品制备  37-38
        2.1.5.1 对照品溶液的制备  37-38
        2.1.5.2 供试品溶液的制备  38
    2.2 实验结果  38-50
      2.2.1 色谱条件优化  38-39
        2.2.1.1 流动相系统的选择  38-39
        2.2.1.2 洗脱方式的选择  39
      2.2.2 线性关系  39-41
      2.2.3 精密度试验  41-42
      2.2.4 稳定性试验  42-43
      2.2.5 重复性试验  43-44
      2.2.6 回收率试验  44-45
      2.2.7 耐用性试验  45-48
      2.2.8 样品测定  48-50
  3 小结与讨论  50-52
总结  52-55
致谢  55-56
参考文献  56-58
综述  58-73
  参考文献  67-73
部分化合物谱图  73-93
附件一  93-94

芩术四物汤治疗原发性痛经的药效物质基础研究

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