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中药茜草乙酸乙酯萃取组分的分离与鉴定及其生物活性研究

作　者: 肖烽
导　师: 陈嵘
学　校: 武汉工程大学
专　业: 应用化学
关键词: 中药茜草分离鉴定抗银屑病抗氧化
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

中药茜草为茜草科植物茜草(Rubia cordifolia L.)及同属近缘植物的干燥根及茎，是我国传统常用中药之一，在我国有着广阔的资源分布。除已报道的生物活性外，近年来研究发现茜草具有抗银屑病(抑制人体表皮细胞异常增殖)、抗肿瘤以及抗氧化等生物活性，引起了研究人员的广泛关注。目前茜草生物活性的研究大多集中在醇或水的粗提物上，有关茜草乙酸乙酯萃取物的生物活性研究很少见报道。本课题前期研究表明，茜草乙酸乙酯萃取物的抗银屑病活性和抗氧化活性最为明显，但乙酸乙酯萃取组分的分离、鉴定及生物活性未见报道。本论文以中药茜草乙酸乙酯萃取组分为研究对象，通过生物活性追踪法，对其进行进一步的分离及纯化，得到了不同的分离组分210个和单体化合物12个；通过波谱学技术对单体进行结构鉴定和解析；测定了各级组分和单体的抗银屑病活性及抗氧化活性，为探索中药茜草的药用机理及新的临床应用奠定基础。具体研究工作如下：1.运用吸附柱色谱、薄层色谱、过滤、重结晶等分离技术和手段，对中药茜草乙酸乙酯萃取物进行分离和纯化，得到不同的分离组分210个及单体化合物12个。通过高效液相色谱(HPLC)、红外光谱(IR)、核磁共振波谱(1H-NMR,13C-NMR)以及质谱(MS)等对单体的纯度和结构进行分析和鉴定，确定化合物7、10、11和12分别为1-羟基-2-甲氧基蒽醌、2-甲基蒽醌、1-羟基-2-甲基蒽醌和1,4-二羟基-2-甲基蒽醌。其他的八个化合物，有待进一步解析。2.采用MTT法对分离得到的各级组分及单体化合物的抑制人体表皮细胞(HaCaT)增殖活性进行了测定。结果表明在二级组分ⅡA~ⅡK中活性成分主要集中在极性较小的ⅡJ和ⅡK组分中。ⅡJ和ⅡK进一步分离得到组分中，ⅡJ2、ⅢKF和IVKFF的抑制HaCaT细胞增殖的活性较高，其IC50值分别为10、14.5和12.5μg/mL。分离得到的单体化合物中10和11对HaCaT细胞增殖抑制活性较高，其IC50值分别为31.91和20.97μg/mL。3.采用铁离子还原(Ferric Reducing Antioxidant Power, FRAP)法、硫代巴比妥酸(2-Thiobarbituric Acid, TBA)法及二苯代苦味酰基自由基(1,1-Dipheny-2-picrylhydrazyl, DPPH·)法测定了分离得到的各级组分和单体化合物的总抗氧化活性、抗脂质过氧化活性及清除自由基活性。实验结果表明：二级组分ⅡA~ⅡK中极性较大组分的抗氧化能力高于极性较小组分，ⅡA的总抗氧化能力最强；组分ⅡA~ⅡH的抗脂质过氧化能力明显高于维生素(Vc)，其中ⅡA组分最为明显；在ⅡA分离得到的三级组分ⅢAA~ⅢAJ中，组分ⅢAF的抗氧化能力相对较强；在分离得到的单体化合物中化合物1的总的抗氧化活性最强。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
第1章绪论  11-25
  1.1 研究背景  11-12
  1.2 中药茜草的研究概况  12-23
    1.2.1 中药茜草的生态学特征及分布  12-13
    1.2.2 中药茜草的主要化学成分  13-21
    1.2.3 中药茜草的生物活性  21-23
  1.3 本论文选题意义及研究内容  23-25
第2章中药茜草乙酸乙酯萃取物化学成分研究  25-53
  2.1 引言  25
  2.2 实验仪器与材料  25-26
    2.2.1 仪器  25-26
    2.2.2 试剂  26
    2.2.3 色谱填料  26
    2.2.4 药材  26
  2.3 茜草乙酸乙酯萃取物的制备  26-27
  2.4 茜草乙酸乙酯萃取物的分离  27-36
    2.4.1 吸附柱色谱  27-30
    2.4.2 茜草乙酸乙酯萃取物的一级分离  30-33
    2.4.3 组分 ⅡA 的分离  33
    2.4.4 组分 ⅡK 的分离  33-34
    2.4.5 单体化合物 1~12 的分离过程  34-35
    2.4.6 其他组分的分离  35-36
  2.5 单体化合物的结构鉴定  36-51
    2.5.1 化合物 10、11 和 12 的结构鉴定  36-49
    2.5.2 化合物 1~9 的结构鉴定  49-51
  2.6 本章小结  51-53
第3章中药茜草乙酸乙酯萃取成分抗银屑病活性研究  53-61
  3.1 引言  53-54
  3.2 材料与方法  54-56
    3.2.1 材料和仪器  54-55
    3.2.2 方法  55-56
  3.3 实验结果与分析  56-60
    3.3.1 MTT 法检测 ⅡA~ⅡK 对 HaCaT 细胞的细胞毒性  56-57
    3.3.2 MTT 法检测从 ⅡJ、ⅡK 中分离出的组分对 HaCaT 细胞的细胞毒性  57-59
    3.3.3 MTT 法检测单体化合物对 HaCaT 细胞的细胞毒性  59-60
  3.4 本章小结  60-61
第4章中药茜草乙酸乙酯萃取成分抗氧化活性研究  61-81
  4.1 引言  61-62
  4.2 实验材料及仪器  62
    4.2.1 实验材料  62
    4.2.2 仪器  62
  4.3 实验方法  62-69
    4.3.1 样品溶液的制备  62-63
    4.3.2 FRAP 法测定总抗氧化能力  63-65
    4.3.3 TBA 法测定抗脂质过氧化活性  65-67
    4.3.4 DPPH·法测定清除自由基能力  67-69
  4.4 结果与讨论  69-80
    4.4.1 组分 ⅡA~ⅡK 的抗氧化活性  69-73
    4.4.2 组分 ⅢAA~ⅢAJ 的抗氧化活性  73-76
    4.4.3 单体化合物 1~8 的抗氧化活性  76-80
  4.4 本章小结  80-81
第5章总结  81-83
参考文献  83-91
附录  91-107
作者在硕士期间已发表和待发表的文章  107-109
致谢  109

中药茜草乙酸乙酯萃取组分的分离与鉴定及其生物活性研究

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