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落叶松中二氢槲皮素的提取及活性研究

作　者: 陈玥舟
导　师: 张泽生
学　校: 天津科技大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 二氢槲皮素最佳提取工艺纯化方法体外抗氧化
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

本实验以落叶松为原料提取二氢槲皮素,优化提取工艺,重在探寻分离效果好的新型纯化材料,并通过体外抗氧化指标研究二氢槲皮素的活性。实验考察提取溶剂、提取方法、原料目数、提取温度、时间和料液比六种单因素对提取率的影响。通过单因素实验,确定以提取温度、时间和料液比三种单因素设计正交实验,最终确定最佳提取工艺条件：采用水热浸提的方法,温度为90℃,时间为40min,料液比为1：12,提取3次。经过高效液相色谱检测,上述条件下二氢槲皮素的提取率达到85%以上。实验探讨了活性炭吸附法、乙醇沉淀法、大孔树脂吸附法、聚酰胺树脂吸附法四种纯化方法对二氢槲皮素粗提物纯化的效果。结果表明,活性炭脱色不适用于二氢槲皮素的纯化,聚酰胺树脂的纯化效果最佳,而将醇沉与大孔吸附树脂结合可作为一种新的纯化方法。实验确定最佳纯化条件为：粗提液浓缩至料液比1：2,在搅拌状态下加入95%乙醇至终浓度70%,于4℃冰箱静置3h后在4000r/min的条件下离心15min,二氢槲皮素保留为95.7%。再以H103大孔树脂吸附12h,以60%乙醇解吸4h,解吸液添加量为80mL/g,二氢槲皮素保留率为97.8%。此外,实验通过与L-抗坏血酸对比,研究了二氢槲皮素的体外抗氧化活性。结果表明,在还原能力、OH自由基清除能力和DPPH自由基清除能力上,二氢槲皮素都弱于L-抗坏血酸,且在OH自由基清除能力上明显不如L-抗坏血酸；而在ABTS自由基清除能力上,二氢槲皮素表现出的活性略强于L-抗坏血酸。在抑制红细胞溶血能力上,二氢槲皮素强于L-抗坏血酸。本实验采用大孔吸附树脂纯化二氢槲皮素,并取得良好的效果,拓宽了二氢槲皮素纯化的研究方法。体外抗氧化实验说明,二氢槲皮素能够对红细胞起到更好的保护作用,防止其氧化溶血,因而在降低毛细血管氧化损伤的方面表现出良好的抗氧化活性。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-10
1 前言  10-17
  1.1 概况  10
  1.2 二氢槲皮素的理化性质  10-12
    1.2.1 基本结构和作用  10-11
    1.2.2 理化性质  11-12
  1.3 二氢槲皮素的生物活性  12-14
    1.3.1 体内抗氧化作用  12
    1.3.2 对脂代谢的影响  12
    1.3.3 对癌细胞的影响  12-13
    1.3.4 对急性淋巴细胞的影响  13
    1.3.5 对细胞内外酶的影响  13
    1.3.6 对病毒的影响  13
    1.3.7 其他活性  13-14
  1.4 二氢槲皮素的应用  14
    1.4.1 食品领域中的应用  14
    1.4.2 医药领域中的应用  14
    1.4.3 工业领域中的应用  14
  1.5 二氢槲皮素提取的研究进展  14-15
  1.6 本论文研究的目的、意义和主要内容  15-17
    1.6.1 本论文研究的目的和意义  15-16
    1.6.2 本论文研究的主要内容  16-17
2 材料和方法  17-31
  2.1 材料、试剂和主要仪器  17-20
    2.1.1 材料和试剂  17-19
    2.1.2 主要仪器  19-20
  2.2 方法  20-31
    2.2.1 二氢槲皮素检测方法的建立  20
    2.2.2 落叶松木屑成分测定  20-23
    2.2.3 落叶松中二氢槲皮素提取工艺的优化  23-24
    2.2.4 活性炭吸附脱色  24-25
    2.2.5 乙醇沉淀除杂  25
    2.2.6 树脂纯化二氢槲皮素  25-27
    2.2.7 二氢槲皮素的精制  27
    2.2.8 二氢槲皮素的体外抗氧化活性研究  27-31
3 结果与讨论  31-55
  3.1 检测方法的建立  31-33
    3.1.1 检测波长的确定结果  31
    3.1.2 总黄酮标准曲线的制定结果  31-32
    3.1.3 二氢槲皮素标准曲线的制定结果  32-33
  3.2 落叶松木屑成分的分析结果  33-34
    3.2.1 总糖含量标准曲线的制定结果  33
    3.2.2 还原糖标准曲线的制定结果  33-34
    3.2.3 原料基本成分  34
  3.3 二氢槲皮素提取工艺优化的实验结果  34-39
    3.3.1 二氢槲皮素提取的单因素实验结果  34-38
    3.3.2 二氢槲皮素提取的正交实验结果及分析  38-39
    3.3.3 提取次数的确定结果  39
  3.4 活性炭吸附脱色的实验结果  39-42
    3.4.1 活性炭添加量对脱色效果的影响  39-40
    3.4.2 时间对脱色效果的影响  40-41
    3.4.3 脱色温度对脱色效果的影响  41
    3.4.4 活性炭脱色的效果  41-42
  3.5 乙醇沉淀的纯化实验结果  42-44
    3.5.1 乙醇浓度对纯化效果的影响  42
    3.5.2 水提液浓缩比例对纯化效果的影响  42-43
    3.5.3 静置时间对纯化效果的影响  43-44
    3.5.4 乙醇沉淀法的效果  44
  3.6 树脂纯化的实验结果  44-51
    3.6.1 不同树脂的纯化效果比较  44-45
    3.6.2 树脂纯化条件优化的实验结果  45-49
    3.6.3 树脂纯化二氢槲皮素的效果  49-51
  3.7 二氢槲皮素的精制结果  51
  3.8 二氢槲皮素的体外抗氧化活性研究结果  51-55
    3.8.1 还原力的测定  51-52
    3.8.2 羟自由基清除能力的测定  52
    3.8.3 ABTS自由基清除能力的测定  52-53
    3.8.4 DPPH自由基清除能力的测定  53-54
    3.8.5 抑制红细胞溶血能力的测定  54-55
4 结论  55-56
5 展望  56-57
6 参考文献  57-63
7 攻读硕士学位期间发表论文情况  63-64
8 致谢  64

落叶松中二氢槲皮素的提取及活性研究

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