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黄连及其有效组分小檗碱的生物活性研究

作　者: 李小玲
导　师: 胡艳军
学　校: 湖北师范学院
专　业: 分析化学
关键词: 黄连小檗碱 DNA 蛋白质光谱方法抑菌活性
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

黄连(Coptidis rhizoma)，属毛茛科多年生草本植物，为传统中药要药，具有清热燥湿，泻火解毒之功效。其多种有效组分暨复杂的化学成分，赋予了黄连在治疗疾病的过程中表现出多靶点的作用特点。多种有效组分(或活性成分)的多靶点作用及单分子对多个靶点的作用，使得黄连在抗炎、抗病毒及抗肿瘤等方面表现出广泛的生理活性。然而，如何用现代语言阐释黄连及其有效组分的治疗原理，明确其发挥生物活性的机制，仍是中医药研究领域的难点之一。本文以黄连及其主要生物碱(小檗碱)为主题，运用紫外-可见光谱和荧光光谱等手段系统研究了小檗碱与DNA、蛋白质等生物大分子作用的分子机制，并比较了小檗碱、黄连及黄连解毒汤的抑菌效应，为阐明黄连整体治疗的特点提供了指导和理论依据。本论文分五章，具体内容安排如下：第一章：主要综述了中药研究现状，尤其是黄连及其有效组分(小檗碱)的研究进展。概述了药物活性小分子与DNA和蛋白质相互作用的研究进展，包括DNA和血清白蛋白及血红蛋白的结构和功能以及方法学研究。阐述了研究药物活性小分子与DNA和蛋白质相互作用的意义，确立了本课题探讨黄连及其有效组分小檗碱生物活性的立论依据。第二章：运用紫外-可见光谱、荧光光谱等光谱法研究了近似生理条件下黄连有效组分小檗碱(BH)与鲱鱼精DNA(hs-DNA)的相互作用，并以中性红(NR)和吖啶橙(AO)为DNA荧光探针，详细探讨了小檗碱与DNA的荧光特征和作用机制；首次深入探讨了温度、离子强度、变性剂、不同的热变性温度及酸度等对体系荧光分析的影响，通过多种方法的相互印证而详细阐述了小檗碱与DNA的作用模式；描述了小檗碱与DNA的键合特点，计算了反应的结合常数、结合位点数及热力学参数等。研究结果对确定小檗碱为新的DNA靶向药物和无毒DNA荧光探针提供重要的信息和依据。第三章：利用紫外-可见光谱、荧光光谱等光谱法考察小檗碱作为荧光探针在实际研究中的应用。通过溴化乙啶(EB)、吖啶橙(AO)及小檗碱(BH)等荧光探针与姜黄素(Cur)的竞争作用，佐证了小檗碱与DNA的作用模式；详细阐述了阴离子猝灭作用、化学变性剂、热变性及酸度等对体系的影响，阐明了小檗碱作为荧光探针的可靠性。第四章：通过光谱法研究了小檗碱与牛血红蛋白的相互作用，探讨了体系的荧光猝灭机理；计算并探讨了反应的结合常数、结合位点数、热力学参数、相互作用的模式；通过同步荧光光谱考察了小檗碱对牛血红蛋白二级结构所产生的变化；考察了共存离子对研究体系的影响，为从分子水平阐述小檗碱在生物体内的作用机理提供了基础性的参数；第五章：采用加热回流提取法，探讨了乙醇浓度、回流时间、固液比、回流次数四个因素对黄连中小檗碱提取率的影响，并探索了乙醇提取小檗碱的最佳工艺条件；首次对比研究了小檗碱、黄连及黄连解毒汤与牛血红蛋白的作用，以及对大肠杆菌的抑菌活性，分析了小檗碱对黄连及黄连解毒汤的贡献，结合一定水平的药理学和生物活性指标，为中药配伍及合理用药提供了参考和借鉴。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
第一章绪论  10-25
  1.1 中药及其活性组分  10-13
  1.2 药物小分子与生物大分子的相互作用  13-17
  1.3 药物小分子与生物大分子相互作用的研究进展  17-22
  1.4 研究药物小分子与生物大分子相互作用的意义  22-23
  1.5 黄连及其有效组分的生物活性  23-24
  1.6 本论文的选题思路  24-25
第二章黄连有效组分小檗碱与 DNA 作用机制的研究  25-46
  2.1 引言  25-26
  2.2 实验部分  26-27
  2.3 结果与讨论  27-45
  2.4 本章小结  45-46
第三章小檗碱作为荧光探针在实际研究中的应用  46-59
  3.1 引言  46-47
  3.2 实验部分  47-48
  3.3 结果与讨论  48-58
  3.4 本章小结  58-59
第四章小檗碱与牛血红蛋白的相互作用  59-69
  4.1 引言  59
  4.2 实验部分  59-60
  4.3 结果与讨论  60-68
  4.4 本章小结  68-69
第五章黄连及其有效组分和复方抑菌活性的比较  69-79
  5.1 引言  69-70
  5.2 实验部分  70-72
  5.3 结果与讨论  72-78
  5.4 本章小结  78-79
致谢  79-80
参考文献  80-93
附录 1 攻读硕士期间发表论文目录  93-95
附录 2 攻读硕士期间获奖情况  95-96
附录 3 攻读硕士期间承担项目及参加会议情况  96

黄连及其有效组分小檗碱的生物活性研究

内容摘要

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