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川北灵芝质量标准及其指纹图谱研究

作　者: 江丽青
导　师: 李绛
学　校: 成都理工大学
专　业: 分析化学
关键词: 川北灵芝含量测定质量标准指纹图谱
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

灵芝具有显著的生物多样性特征,对其不同来源品种进行质量标准和指纹图谱研究具有重要的应用价值。川北灵芝系四川农业大学与成都荣宝生物科技有限公司用四川省北部地区的一株野生灵芝(Ganoderma lucidum)培育而成的赤芝新品种,已连续三年在成都市青白江区实现规模化栽培种植,年产量达50吨以上。本文在《中国药典》2010版一部灵芝药材质量标准的基础上,对川北灵芝的质量标准及其指纹图谱进行了系统研究。第一部分对灵芝药材分别进行了薄层鉴别、显微鉴别、理化鉴别,然后研究了其理化性质,结果表明：各相关项的检查结果均符合《中国药典》2010版一部灵芝项下各项指标。第二部分测定了灵芝药材中多糖的含量。多糖测定法：根据《中国药典》2010版一部中灵芝多糖测定方法进行测定,并且进行了方法学考察,结果精密度、重复性、稳定性的RSD均小于3.0%,回收率良好。测定结果表明,川北灵芝与美芝、日芝、韩芝中多糖含量相差不大,且都大于《中国药典》2010版一部灵芝多糖规定限度0.5%。第三部分检测了灵芝药材中灵芝酸A的含量。灵芝酸A测定法：高相液相色谱法,首先确定了供试品溶液的制备方法与HPLC分析条件,然后进行了线性关系的考察,灵芝酸A的线性范围为0.010mg/mL～1.200mg/mL,方法学考察结果的RSD均小于3.0%,平均回收率为99.35%。测定结果表明,川北灵芝中灵芝酸A含量均高于其它品种的灵芝,且不同采收时期,不同采收区间的川北灵芝中灵芝酸A的含量也有差异。第四部分检测了灵芝药材中四种核苷(尿嘧啶核苷、鸟苷、肌苷、腺苷)的含量。核苷测定法：高效液相色谱法,首先确定供试品溶液的制备方法与HPLC分析条件,然后进行了线性关系的考察,尿嘧啶核苷的线性范围为0.0035～0.1400mg/mL,平均回收率为101.0%；肌苷的线性范围为0.0160～0.0032mg/mL,平均回收率为101.0%；鸟苷的线性范围为0.0070～0.1400mg/mL,平均回收率为97.7%；腺苷的线性范围为0.0035～0.1400mg/mL,平均回收率为100.0%。方法学考察结果的RSD均小于3.0%。测定结果表明,川北灵芝中均含有肌苷,而其它三个菌种的灵芝中均无肌苷,但这三种灵芝中尿嘧啶核苷、鸟苷、腺苷的含量均高于川北灵芝。第五部分对灵芝药材中脂溶性成分的指纹图谱进行了系统研究。首先确定了各供试品溶液的制备方法与样品的HPLC色谱条件,然后进行了精密度、重复性和稳定性试验,结果其RSD均小于3.0%,最后,建立了灵芝药材脂溶性成分的指纹图谱,对比分析指纹图谱发现美芝、日芝、韩芝的图谱与川北灵芝的图谱差别较大,只含有个别共有峰,所以选择了11批川北灵芝的指纹图谱确定了共有峰、共有模式及其评价方法。结果表明：各批次样品脂溶性成分指纹图谱的相似度均大于0.900。因此,本文所建立的指纹图谱分析方法准确且便于操作,可以用于灵芝药材的质量评价与控制。第六部分初步建立了川北灵芝药材的质量标准草案,与《中国药典》2010版一部中灵芝质量标准相比较,除了性状、鉴别、水分、总灰分、浸出物、多糖含量指标外,还增加了灵芝酸A、四种核苷(尿嘧啶核苷、鸟苷、肌苷、腺苷)作为指标成分,在此基础上建立的脂溶性成分指纹图谱也作为新增检查项。综上所述,通过对川北灵芝药材质量标准及其指纹图谱的研究,川北灵芝的总多糖含量符合《中国药典》2010版一部的相关要求；灵芝酸A的平均含量在1.3697mg/g～5.5775mg/g范围内；尿嘧啶核苷的平均含量在0.1480mg/g～0.8819mg/g范围内,肌苷的平均含量在0.0388mg/g～0.7118mg/g范围内,鸟苷的平均含量在0.1980mg/g～0.7491mg/g范围内,腺苷的平均含量在0.0307mg/g～0.2290mg/g范围内；脂溶性成分指纹图谱确定了35个共有峰,各批川北灵芝药材指纹图谱相似度均大于0.900。因此,建立的质量标准草案能够基本反映灵芝药材的内在质量,为灵芝的栽培、产品开发和应用等方面提供质量保障。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
第1章前言  11-18
  1.1 研究意义  11-13
  1.2 研究现状  13-17
    1.2.1 灵芝活性成分的研究进展  13-16
    1.2.2 灵芝鉴别方法的研究进展  16
    1.2.3 中药指纹图谱的研究进展  16-17
  1.3 研究内容  17-18
    1.3.1 川北灵芝质量标准的建立  17
    1.3.2 川北灵芝指纹图谱的建立  17-18
第2章川北灵芝一般鉴别项的研究  18-26
  2.1 药材的品种来源  18-19
  2.2 鉴别  19-23
    2.2.1 显微鉴别  19
    2.2.2 薄层鉴别  19-21
    2.2.3 化学鉴别  21-23
  2.3 检查  23-25
    2.3.1 材料、仪器及试剂  23
    2.3.2 水分的测定  23-24
    2.3.3 总灰分的测定  24-25
    2.3.4 浸出物的测定  25
  2.4 讨论与小结  25-26
第3章灵芝药材中多糖含量的测定  26-31
  3.1 材料、仪器及试剂  26
  3.2 实验方法与结果分析  26-30
    3.2.1 对照品溶液的配制  26
    3.2.2 供试品溶液的制备  26
    3.2.3 标准曲线的绘制  26-27
    3.2.4 方法学考察  27-29
    3.2.5 样品中多糖含量的测定  29-30
  3.3 讨论与小结  30-31
第4章灵芝药材中灵芝酸A的含量测定  31-37
  4.1 材料、仪器及试剂  31
  4.2 实验方法与结果分析  31-36
    4.2.1 色谱条件  31-32
    4.2.2 标准品的制备  32
    4.2.3 供试液的制备  32
    4.2.4 线性关系的考察  32-33
    4.2.5 方法学考察  33-35
    4.2.6 样品含量的测定  35-36
  4.3 讨论与小结  36-37
第5章灵芝药材中肌苷、鸟苷、腺苷、尿嘧啶核苷的含量测定  37-48
  5.1 材料、仪器及试剂  37
  5.2 实验部分  37-46
    5.2.1 色谱条件  37
    5.2.2 标准品的制备  37-38
    5.2.3 供试液的制备  38
    5.2.4 线性关系的考察  38-39
    5.2.5 方法学考察  39-45
    5.2.6 样品含量的测定  45-46
  5.3 讨论与小结  46-48
第6章川北灵芝药材脂溶性成分指纹图谱的研究  48-74
  6.1 材料、仪器及试剂  48
  6.2 实验方法与结果分析  48-73
    6.2.1 不同提取因素考察  48-55
    6.2.2 色谱条件的考察  55-62
    6.2.3 方法学考察  62-66
    6.2.4 指纹图谱及各项技术参数  66-73
  6.3 讨论与小结  73-74
第7章川北灵芝药材质量标准(草案)的建立  74-78
结论与展望  78-80
致谢  80-81
参考文献  81-84
攻读学位期间取得学术成果  84-85
附：灵芝药材的质量标准（2010版《中国药典》）  85-86

川北灵芝质量标准及其指纹图谱研究

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