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金银花叶中绿原酸的提取、纯化及抑菌性质研究

作　者: 周莲
导　师: 唐春红
学　校: 重庆工商大学
专　业: 环境工程
关键词: 金银花叶绿原酸提取均匀设计抑菌
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

金银花(Flos Lonicerae)为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或初开的花，具有清热解毒、凉散风热、保肝利胆等功效，是常用中药材之一。金银花之所以具有清热解毒等功效，是因为其含有一种有效成分—绿原酸（chlorogenic acid）。绿原酸也被称为咖啡酸，分子式C16H18O9，由植物在有氧呼吸过程中产生的咖啡酸(caffeic acid)与奎尼酸(quinic acid)缩合而成，它具有多种生物活性如：抗氧化作用、抗癌作用、抗菌作用、抗病毒作用等。目前已经开发出多种以金银花为主要成分的药品、保健品和功能性食品等产品，如金银花含片、凉茶、牙膏等，然而一直以来它的叶片作为废弃物被丢弃，实际上，与金银花一样，金银花叶片中也含有大量的绿原酸，因此本研究选择废弃的金银花叶片作为绿原酸的提取原料，以绿原酸得率为指标，采用均匀设计法研究超声波提取工艺和索氏提取工艺，并对两种提取方法进行了比较，确定了较好的提取方法和提取条件；通过金银花叶中绿原酸的纯化工艺，采用HPLC法、红外光谱法对金银花叶中提取物进行了定性分析；采用D值法确定了绿原酸对大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度，在此基础上研究了绿原酸对大肠杆菌、黑曲霉菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑菌效果，进一步考察了绿原酸在绿豆饮料中防腐效果，并得到以下结论：1金银花叶中绿原酸提取条件的研究均匀设计法优化超声提取金银花叶中绿原酸的最优工艺条件为提取温度为60℃、提取时间为240min、乙醇浓度为35%、超声功率为200W、料液比为1:40，绿原酸的得率为10.5mg/g，而索氏提取金银花叶中绿原酸的最优工艺条件为提取时间为240min、乙醇浓度为55%、料液比为1:10，绿原酸的得率为10.18mg/g。从结果可以看出，虽然超声提取绿原酸的得率和索氏提取绿原酸的得率几乎一样，但是超声提取工艺在原料用量比索氏提取工艺更少并且还能对提取温度进行控制。2金银花叶中绿原酸粗提物的纯化及定性分析通过金属盐离子沉淀法和有机溶剂萃取法的复合纯化工艺，对金银花叶中绿原酸粗体物进行纯化，采用HPLC和傅里叶红外光谱仪对金银花叶中纯化物进行定性分析，结果显示纯化物含有醇羟基、酚羟基、芳环骨架、-CH2-、-C=C-、酯键、羧酸，与绿原酸标准品结构一致；且通过HPLC测得绿原酸通过纯化工艺后纯度从纯化前的57.96%提升到81.32%。3金银花叶中绿原酸抑菌性质及其影响条件的研究采用D值法用计算机线性回归算得金银花叶提取物对大肠杆菌的最低抑菌浓度（MIC）为15.05%，对金黄色葡萄球菌的MIC为17.57%，然后再采用滤纸片法用浓度为18%金银花叶提取处理大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌、黑曲霉、枯草芽孢杆菌得到各供试菌种抑菌圈直径分别为10.0mm、8.4mm、7.0mm、9.2mm、6.0mm，可见金银花叶提取物对供试菌均有一定的抑制作用。通过滤纸片法对绿原酸抑菌效果的影响条件进行初步探索，结果显示其抑菌效果主要受温度影响，绿原酸抑菌效果受温度的升高而增加，但是当温度超过60℃时，抑菌效果明显下降；pH值和紫外灯照时间对其抑菌效果影响不大，不过绿原酸在酸性条件下的抑菌效果略好。4绿原酸在绿豆沙饮料中防腐效果的研究根据菌落总数测定（GB4789.2-2010）方法测定巴氏灭菌后，添加和未添加绿原酸的绿豆沙饮料中菌落总数，结果显示在7℃储藏条件下，未添加任何防腐剂的绿豆沙饮料保存期只有11天，而添加了1.0g/kg绿原酸标品的绿豆沙饮料可以保存15天，说明绿原酸在一定程度上可以延长绿豆饮料的保存期。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-9
第一章文献综述  9-20
  1 金银花叶中生物活性物质及应用  9-14
    1.1 黄酮类  9-10
    1.2 有机酸  10-14
  2 绿原酸的提取方法  14-15
    2.1 溶剂提取法  14
    2.2 超声波提取法  14-15
    2.3 酶提取法  15
  3 绿原酸的检测方法  15-18
    3.1 紫外分光光度法  15
    3.2 高效液相色谱法  15-16
    3.3 红外光谱法  16-18
  4 绿原酸的应用现状  18-19
    4.1 食品工业  18
    4.2 医药工业  18
    4.3 日用化妆业  18-19
  5 立题依据  19-20
第二章金银花叶中绿原酸的提取工艺研究  20-33
  1 试剂与仪器  20-21
  2 方法  21-24
    2.1 绿原酸标准曲线的绘制  21
    2.2 金银花叶提取物中绿原酸的测定  21-22
    2.3 金银花叶中绿原酸的超声提取条件的确定  22-23
    2.4 金银花叶中绿原酸索氏提取条件的确定  23-24
  3 结果与分析  24-32
    3.1 金银花叶中绿原酸的超声提取工艺条件的确定  24-29
    3.2 金银花叶中绿原酸的索氏提取工艺条件的确定  29-32
  4 小结与讨论  32-33
    4.1 小结  32
    4.2 讨论  32-33
第三章绿原酸的纯化及定性  33-40
  1 仪器与试剂  33
  2 方法  33-34
    2.1 金银花叶提取物的纯化  33-34
    2.2 傅里叶红外光谱仪测定金银花叶提取物  34
    2.3 HPLC 测定金银花叶提取物（绿原酸）  34
  3 结果与分析  34-38
    3.1 金银花叶提取物的傅里叶红外光谱分析  34-36
    3.2 金银花叶提取物的高效液相色谱分析  36-38
  4 小结与讨论  38-40
    4.1 小结  38-39
    4.2 讨论  39-40
第四章绿原酸抑菌能力分析  40-50
  1 仪器与试剂  40-41
  2 方法  41-43
    2.1 待测材料灭菌  41
    2.2 活化微生物  41
    2.3 制备菌悬液  41
    2.4 测定 MIC 值  41-43
  3 结果与分析  43-48
    3.1 提取物（绿原酸）对 EC 的 MIC 值  43-45
    3.2 提取物（绿原酸）对 SA 的 MIC 值  45-46
    3.3 金银花叶提取物（绿原酸）的抑菌效果  46
    3.4 金银花叶提取物（绿原酸）的抑菌影响条件  46-48
  4 小结与讨论  48-50
    4.1 小结  48-49
    4.2 讨论  49-50
第五章绿原酸在绿豆饮料中的应用研究  50-53
  1 仪器与材料  50-51
  2 方法  51
    2.1 绿豆饮料的制备  51
    2.2 测试方法  51
  3 结果  51-52
  4 小结  52-53
结论  53-55
参考文献  55-60
致谢  60-61
在读期间发表的文章  61

金银花叶中绿原酸的提取、纯化及抑菌性质研究

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