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蝉花真菌的筛选及其液态发酵工艺的优化

作　者: 文欣
导　师: 刘素纯
学　校: 湖南农业大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 蝉花 液态发酵 紫外诱变 蝉花菌丝体 菌种分离
分类号: R282.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


蝉花是一种历史悠久的药用真菌,其含有多种氨基酸、无机盐和生物活性类物质。随着自然环境的变化,蝉花资源开始稀缺,本文从蝉花中微生物的筛选、优良蝉花菌株的选育和蝉花液态发酵工艺的优化三个方面对人工培育蝉花进行研究,所得结果如下：1.从天然蝉花中对其微生物进行分离筛选,得到蝉花真菌V17,经鉴定该菌株为蝉拟青霉。将菌株进行液态发酵,5d时获得的生物量为5.25g/L。对蝉花菌丝体的粗成分进行测定,其水分含量为8.91%,粗蛋白含量为27.19%,粗脂肪含量为7.79%,粗纤维含量为6.20%,灰分含量为1.71%,与天然蝉花的成分接近。测定其菌丝体中生物活性物质,其虫草酸的含量为149.52mg/g,真菌多糖的含量为122.02mg/g,均高于天然蝉花的含量。2.采用紫外线对蝉花真菌V17进行诱变,诱变的剂量为90s,致死率为85%,得到一株菌丝体产量较高的菌株V17-7,其发酵液中的生物量为5.99g/L,增加了14.10%。对V17-7菌株的菌丝体中生物活性物质进行测定,其菌丝体中虫草酸含量达197.24mg/g,增加31.92%；真菌多糖含量达137.24mg/g,增加12.48%。对该菌株进行传代试验,连续传代7次,各项数值基本不变,遗传性稳定。3.对蝉花真菌的发酵培养基中的C源、N源、蝉蜕添加量等条件进行研究,得出在PDA液态培养基中添加2.5%的葡萄糖、0.3%的蛋白胨和3%的蝉蜕可以提高发酵液中的生物量；通过改变发酵过程中的培养温度、接种量大小和摇床速率的大小,对液态发酵工艺进行优化,最优的发酵工艺为28℃、6%的接种量和210r/min的摇床速率。通过对培养基和发酵工艺的优化,发酵液中的生物量提高到6.97g/L。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-7
目录  7-12
第一章 绪论  12-23
  引言  12
  1 蝉花的概述  12-17
    1.1 蝉花的生物学特征  12-13
    1.2 蝉花的主要化学成分  13-15
      1.2.1 真菌多糖类  13-14
      1.2.2 氨基酸类  14
      1.2.3 虫草酸  14
      1.2.4 虫草素  14-15
      1.2.5 甾醇类  15
      1.2.6 肽类  15
      1.2.7 无机元素  15
    1.3 蝉花的药理作用  15-17
      1.3.1 蝉花对免疫系统的增强作用  15-16
      1.3.2 虫草的抗肿瘤作用  16
      1.3.3 蝉花对心脑血管的作用  16
      1.3.4 蝉花的广谱抗菌性  16
      1.3.5 蝉花的镇静作用  16-17
      1.3.6 蝉花对肾脏的作用  17
      1.3.7 蝉花对肺气管的作用  17
      1.3.8 蝉花的降血糖作用  17
  2 诱变育种  17-19
    2.1 紫外诱变  17-18
    2.2 激光诱变  18
    2.3 微波诱变  18
    2.4 离子束诱变  18
    2.5 化学方法诱变  18
    2.6 复合诱变  18-19
  3 蝉花真菌液态发酵  19-21
    3.1 液态发酵培养基  19-20
      3.1.1 C源  19
      3.1.2 N源  19
      3.1.3 无机盐和微量元素  19-20
    3.2 液态培养条件的筛选  20-21
      3.2.1 温度  20
      3.2.2 pH值  20
      3.2.3 转速和通气量  20
      3.2.4 接种量  20-21
    3.3 蝉花真菌液态发酵进展  21
  4 研究目的与意义  21
  5 研究内容  21-22
    5.1 蝉花真菌的筛选及其菌丝体的成分分析  21-22
    5.2 紫外诱变选育优良的蝉花真菌  22
    5.3 液态发酵培养优化  22
  6 技术路线  22-23
第二章 蝉花菌种的筛选及成分分析  23-31
  引言  23
  1 材料与方法  23-26
    1.1 试验材料、培养基、试剂、仪器设备  23-24
      1.1.1 实验材料  23
      1.1.2 试验用培养基  23
      1.1.3 试剂  23-24
      1.1.4 仪器与设备  24
    1.2 试验方法  24-26
      1.2.1 蝉花菌株的分离  24
      1.2.2 蝉花真菌的鉴定  24
      1.2.3 孢子悬液的制备  24-25
      1.2.4 液态发酵试验  25
      1.2.5 发酵液生物量测定方法  25
      1.2.6 蝉花菌丝体粗成分测定  25
      1.2.7 虫草酸的测定  25
      1.2.8 真菌多糖的测定  25-26
  2 结果与分析  26-30
    2.1 蝉花真菌的筛选和鉴定  26-27
    2.2 液态发酵试验  27-28
    2.3 蝉花菌丝体粗成分分析  28-29
    2.4 蝉花真菌菌丝体中活性物质的含量  29-30
      2.4.1 虫草酸含量和真菌多糖含量的标准曲线  29
      2.4.2 蝉花真菌菌丝体中活性成分分析  29-30
  3 讨论与结论  30-31
第三章 蝉花真菌的诱变选育  31-36
  引言  31
  1 材料与方法  31-33
    1.1 材料、培养基、试剂、仪器  31
      1.1.1 材料  31
      1.1.2 培养基  31
      1.1.3 试剂  31
      1.1.4 仪器与设备  31
    1.2 试验方法  31-33
      1.2.1 孢子悬液的制备  31-32
      1.2.2 紫外线诱变剂量曲线  32
      1.2.3 孢子悬液的紫外诱变  32
      1.2.4 诱变菌株液态发酵的生物量的测定  32
      1.2.5 诱变菌株菌丝体的虫草酸含量  32
      1.2.6 诱变菌株菌丝体的真菌多糖含量  32
      1.2.7 诱变菌株的遗传稳定性  32-33
  2 结果与分析  33-35
    2.1 紫外诱变剂量曲线  33
    2.2 诱变后各菌株液态培养的生物量  33-34
    2.3 诱变后各菌株菌丝体中真菌多糖的含量  34
    2.4 诱变后各菌株菌丝体中虫草酸的含量  34-35
    2.5 遗传稳定性  35
  3 结论与讨论  35-36
第四章 蝉花真菌液态发酵工艺的优化  36-48
  引言  36
  1 材料与方法  36-39
    1.1 材料、培养基、试剂、仪器  36-37
      1.1.1 材料  36
      1.1.2 培养基  36-37
      1.1.3 试剂  37
      1.1.4 仪器  37
    1.2 试验方法  37-39
      1.2.1 孢子悬液的制备  37
      1.2.2 发酵液中生物量的测定  37
      1.2.3 蝉花菌丝体液态发酵培养基的选择及发酵时间的确定  37
      1.2.4 C源对蝉花真菌生长的影响  37
      1.2.5 N源对蝉花真菌生长的影响  37-38
      1.2.6 蝉蜕的添加量对蝉花真菌生长的影响  38
      1.2.7 正交试验优化培养基  38
      1.2.8 不同温度下蝉花菌丝体的产量  38
      1.2.9 不同接种量下蝉花菌丝体的产量  38
      1.2.10 不同的通气量下蝉花菌丝体的产量  38-39
      1.2.11 正交试验优化发酵工艺  39
  2 结果与分析  39-47
    2.1 培养基和培养时间的确定  39-41
    2.2 C源对蝉花真菌生长的影响  41-42
    2.3 N源对蝉花真菌生长的影响  42-43
    2.4 蝉蜕的含量对蝉花真菌生长的影响  43
    2.5 正交试验优化发酵培养基  43-44
    2.6 不同温度下蝉花菌丝体的产量  44-45
    2.7 不同接种量下蝉花菌丝体的产量  45-46
    2.8 不同摇床速率下蝉花菌丝体的产量  46
    2.9 正交试验优化发酵工艺  46-47
  3 结论与讨论  47-48
全文总结  48-49
参考文献  49-55
致谢  55-56
个人简介  56

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药材 > 各类药材
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