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姜黄素对活性氧所致精子DNA损伤的保护作用

作　者: 龚琴琴
导　师: 张昌军
学　校: 湖北中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 姜黄素(cur) 活性氧(ROS) 精子DNA 环磷酰胺(CTX)
分类号: R277.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

第一章：姜黄素对次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶所致人精子DNA损伤的保护作用目的探讨活性氧对精子DNA损伤的机制,研究姜黄素对活性氧(reactive oxygen species, ROS)所致精子DNA损伤的保护作用,以期寻找一种安全有效的防治精子DNA损伤的药物。方法应用体外培养的方法,经密度梯度离心法优选后的精子作为正常精子模型,采用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶(HX-XO)体系产生活性氧(ROS),然后在有氧环境下,将不同浓度的姜黄素与之共同孵育后,通过酶联免疫吸附法(ELISA法)测定精子悬液中ROS含量,采用精子计算机辅助分析法(Computer-aided sperm analysis, CASA)检测精子活动率,Diff-Quik染色法进行精子形态分析,通过精子尾部低渗膨胀试验评估精子膜功能,通过吖啶橙荧光染色测定精子DNA损伤程度,并与已知的抗氧化剂VitC对照。结果姜黄素低、中、高剂量(1、10、100μg/ml)在相同的条件下均可降低精子悬液活性氧(ROS)含量,显示对ROS所致精子DNA的氧化损伤均具有不同程度的预防作用,对精子膜功能及其精子DNA具有一定的保护作用。姜黄素对精子DNA的保护作用呈双向性,中剂量(10μg/ml)时作用最显著。结论1.在精子体外培养时,培养液中添加适当的抗氧化物在避免精子活力下降和抑制精子膜过氧化损伤方面具有一定作用。2.姜黄素对活性氧所致人精子DNA具有明显的保护作用,其作用机制与降低ROS含量、抗脂质过氧化物产生有关。3.当姜黄素的浓度达到一定浓度时,可从抗氧化剂转换成促氧化作用。第二章：研究姜黄素对环磷酰胺所致小鼠精子DNA损伤的保护作用目的探讨环磷酰胺(cyclophosphamide, CTX)对精子DNA损伤的机制,研究姜黄素对CTX所致精子DNA损伤的保护作用,以期寻找一种安全有效的防治精子DNA损伤的药物。方法选用清洁级昆明雄性小鼠随机分为6组,其中对照组小鼠每天给予维生素C50mg/kg. d灌胃；姜黄素低、中、高组小鼠每天给予姜黄素混悬液100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg灌胃；正常组小鼠及Omg/kg Cur组予等量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,各组均连续处理28天,给药的同时除了正常组外其余各组均按照40mg/kg. d腹腔注射环磷酰胺(CTX),连续5天。末次给药24h后采用颈椎脱臼法处死小鼠,处死前1小时给予Brdu腹腔注射后,取双侧睾丸组织及附睾。常规HE染色切片观察睾丸细胞形态学改变及Brdu免疫组化观察睾丸细胞凋亡情况,制备睾丸组织匀浆检测超氧化物歧化酶(SOD)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量,制备精子悬液检测精子活动率、形态学分析、精子膜功能及精子DNA损伤情况。结果1.睾丸组织的病理学观察光镜下正常组睾丸生精上皮呈规则圆形,排列紧密,结构清晰,层次分明,精原细胞大而圆,规则地紧贴曲细精管的基底膜,向内依次为初级精母细胞、精子细胞、精子。Omg/kg Cur组睾丸曲细精管排列稍稀疏,间质水肿,管腔内各级生精细胞数量减少,层次减少,排列混乱,初级精母阶段不分化,管腔内无成熟精子。姜黄素组睾丸的生精功能损伤较轻,可见初级精母细胞、精子细胞、精子。2.睾丸组织匀浆氧化标志物水平结果与正常组相比,Omg/kg Cur组睾丸组织中SOD、GSH-Px含量均有明显降低(P<0.05), MDA、ROS含量均有明显升高(P<O.01)；经姜黄素干预后,睾丸组织中SOD、GSH-Px含量均有明显升高(P<0.05), MDA、ROS含量均有明显下降(P<0.05)。3.精子的活动率、畸形率、低渗肿胀率比较与正常组相比,Omg/kg Cur组精子活动率、低渗肿胀率均明显下降(P<0.05),精子的畸形率均显著升高(P<0.01)：经姜黄素干预后,其精子活动率、低渗肿胀率均显著升高(P<0.01),精子的畸形率明显减低(P<0.05)。4.精子DNA完整性的比较与正常组相比,Omg/kg Cur组精子DNA完整性显著下降(P<0.05),经姜黄素干预后其精子DNA的完整性均明显提高(P<0.05)。5.睾丸组织Brdu免疫组化观察深棕色为阳性细胞(增殖细胞),Omg/kg Cur组增殖细胞含量明显少于其它各组,正常组及100,150,200mg/kg Cur处理组可见数目较多的增殖细胞。结论1.用腹腔注射环磷酰胺法建立小鼠睾丸氧化损伤的动物模型；在体内可使睾丸组织氧化和抗氧化能力失衡,即抗氧化能力降低,氧自由基堆积。2.姜黄素可以降低小鼠睾丸局部氧化产物ROS、MDA的生成,并增加抗氧化酶SOD、GSH-Px的含量,提高组织的抗氧化能力,保护睾丸结构功能。3.姜黄素可通过对抗脂质过氧化物的产生保护精子膜的功能,从而提高精子的活动率及精子DNA的完整性。4.姜黄素可以促进睾丸精原细胞增殖。

全文目录

中文摘要  4-8
Abstract  8-13
英文缩略词  13-14
前言  14-17
第一章：研究姜黄素对次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶所致人精子DNA损伤的保护作用  17-31
  材料与方法  17-24
  结果  24-27
  讨论  27-30
  小结  30-31
第二章：研究姜黄素对环磷酰胺所致小鼠精子DNA损伤的保护作用  31-50
  材料与方法  31-41
  结果  41-46
  讨论  46-49
  小结  49-50
结语  50-51
思考与展望  51-52
参考文献  52-58
附录  58-74
  综述  58-71
    参考文献  65-71
  附图  71-73
  攻读学位期间发表的学术论文  73-74
致谢  74

姜黄素对活性氧所致精子DNA损伤的保护作用

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