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溴苯腈对SH-SY5Y细胞毒性及NF-κB、MAPKs通路的影响

作　者: 杜清清
导　师: 石年
学　校: 华中科技大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 溴苯腈细胞毒性细胞增殖细胞凋亡 NF-κB MAPKs
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

第一部分溴苯腈对SH-SY5Y细胞增殖与凋亡的影响目的：探讨溴苯腈对SH-SY5Y细胞增殖、凋亡的影响方法：用噻唑蓝(MTT)法检测溴苯腈细胞毒性，根据细胞存活率筛选合适剂量浓度；以选定的溴苯腈剂量组，处理时间为24h，倒置显微镜下观察细胞形态及数目变化；用Hoechst33342/PI双染法和流式细胞术检测溴苯腈对细胞凋亡形态及凋亡率的影响；用噻唑蓝(MTT)法检测溴苯腈分别处理24h和48h后对细胞抑制率及IC50的影响，用细胞计数法测定溴苯腈对SH-SY5Y细胞生长曲线及倍增时间的影响。结果：MTT法测定细胞存活率筛选的合适剂量浓度为0、10、50、100μmol/L。按确定的剂量组处理SH-SY5Y细胞24h，在倒置显微镜下观察细胞形态发现，阴性对照组细胞呈多角形，胞体大，排列紧密，缝隙小；高剂量组细胞呈长梭形状改变，胞体变小，稀疏。溴苯腈对细胞凋亡形态及凋亡率的影响：阴性对照组细胞核染成淡蓝色,形态饱满，核膜完整，核质着色深，密度均匀一致；10、50μmol/L处理组与阴性对照组比较未见异常；100μmol/L可见少量核皱缩变小，染色质浓缩边集，核形态多样，荧光增强，可见少量形似块状的凋亡细胞碎片的特征。与阴性对照组比较，各剂量组溴苯腈对SH-SY5Y细胞早期和晚期凋亡率均无明显影响，差异均无统计学意义（P＞0.05）。检测细胞增殖活力发现,与阴性对照组比较,染毒24h和48h后，50、100μmol/L溴苯腈组的细胞增殖抑制率均增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；与24h各组比,处理48h后50、100μmol/L组的细胞增殖抑制率显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05)。不同浓度溴苯腈处理SH-SY5Y细胞24h和48h后，其IC50分别是267.00±29.54μmol/L，95%CI（193.06～340.40μmol/L)和54.33±8.08μmol/L，95%CI（34.25～74.41μmol/L)，IC50随着时间的延长而减小，差异有统计学意义(P＜0.05)。生长曲线实验结果显示，随着染毒剂量的增加，细胞数目开始增加的时间后延，细胞倍增时间增加，差异均有统计学意义(P＜0.05)；100μmol/L组在0～96h生长曲线中细胞数目无明显变化（P＞0.05）；各组细胞数目在溴苯腈处理24h开始出现差异，组间差异随着培养时间延长更加明显，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：在本实验条件下，根据细胞数目形态、增殖抑制率、生长曲线结果均提示，溴苯腈可抑制SH-SY5Y细胞的增殖；细胞凋亡形态及凋亡率未观察到明显变化。第二部分NF-κB、MAPKs等在溴苯腈致SH-SY5Y细胞增殖抑制中表达及作用初探目的：探讨溴苯腈作用SH-SY5Y细胞后对NF-κB、MAPKs通路的影响。方法：以0、10、50、100μmol/L溴苯腈分别处理SH-SY5Y细胞24h，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测NF-κB、IκBα、Bcl-2、XIAP、p-p38、p-JNK的表达；免疫细胞化学法（immunocytochemistry）检测NF-κB、Cytc-c的表达。结果：溴苯腈处理SH-SY5Y细胞24h，与阴性对照组比较,随着染毒剂量的增加，NF-κB、p-p38、Cytc-c表达增加，IκBα、Bcl-2表达降低，差异均有统计学意义(P＜0.05)；XIAP、p-JNK表达与阴性对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：在本实验条件下，观察到溴苯腈处理后，有NF-κB、p38的激活、Bcl-2表达抑制等表现，其可能与抑制细胞的增殖有关。

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摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-14
第一部分溴苯腈对 SH-SY5Y 细胞增殖与凋亡的影响  14-26
  1 材料与方法  14-18
  2 结果  18-24
  3 讨论  24-26
第二部分 NF-κB、MAPKs 等在溴苯腈致 SH-SY5Y 细胞增殖抑制中表达及作用初探  26-44
  1 材料与方法  26-33
  2 结果  33-41
  3 讨论  41-44
小结  44-45
参考文献  45-50
综述  50-66
  参考文献  58-66
致谢  66

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