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亚砷酸钠对大鼠胰岛β细胞p53、mdm2和Kras基因和蛋白表达的影响

作　者: 孙睿
导　师: 孙鲜策
学　校: 大连医科大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 亚砷酸钠 大鼠胰岛β细胞 p53基因 mdm2基因 Kras基因
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的:砷（As）是一种广泛存在于地壳中的类金属元素，主要以有机砷和无机砷两种形式存在，其中无机砷的毒性更强。人类接触砷最主要的途径是环境暴露，如接触被砷污染的水源。近年有研究显示，长期居住在富砷地区的人群糖尿病高发，提示砷可能对胰岛细胞具有毒性作用。有研究证实砷可引起胰岛细胞凋亡和DNA损伤。但关于砷对胰岛细胞癌基因和抑癌基因表达及其编码的蛋白质的影响尚不明确。本研究探讨了砷对胰岛细胞p53、mdm2和Kras等基因和蛋白表达的影响。方法：选定大鼠胰岛β细胞（INS-1）。用MTT法检测亚砷酸钠对INS-1的毒性作用。用荧光实时定量PCR法检测亚砷酸钠对大鼠胰岛β细胞野生型p53（Tp53）、mdm2和Kras基因表达的影响。用Western blot免疫印迹检测亚砷酸钠对大鼠胰岛β细胞内突变型p53蛋白和mdm2蛋白表达的影响。结果：（1）亚砷酸钠对大鼠胰岛细胞的毒性作用：亚砷酸钠（0、2.5、5、10、20、40、80、160μM）在37℃条件下，分别作用于INS-1细胞48h和72h后， OD值随浓度的递增而降低，细胞存活率随着亚砷酸钠剂量的增大而降低，计算IC50分别为5.66μM、2.78μM；（2）亚砷酸钠对大鼠胰岛细胞Tp53、mdm2和Kras基因表达的影响：48h染毒各组Tp53（野生型p53肿瘤抑制基因）表达呈下降趋势， mdm2、Kras基因表达增高；72h染毒中、低剂量组Tp53肿瘤抑制基因表达下降更加明显，中、高剂量组Kras基因表达率升高更加明显；（3）亚砷酸钠对大鼠胰岛细胞突变型p53蛋白和mdm2蛋白质表达的影响：48h染毒后中、高剂量组突变型p53蛋白表达明显增加，低剂量组突变型p53蛋白表达无明显变化；72h染毒各组突变型p53蛋白表达均增加；而48h染毒和72h染毒均为中、高剂量组mdm2蛋白表达增加；72h染毒组与48h染毒组相比，中、高剂量染毒的p53蛋白表达量增加的差别显著。结论：亚砷酸钠作用于INS-1可造成细胞内抑癌基因Tp53表达率降低，且致癌基因mdm2和Kras的表达率增加；砷可导致INS-1细胞Tp53向突变型p53的转变。

全文目录


摘要  7-8
Abstract  8-10
前言  10-11
材料和方法  11-14
  1. 材料  11
    1.1 细胞  11
    1.2 药品和主要试剂  11
    1.3 主要仪器  11
  2. 实验方法  11-13
    2.1 细胞培养、处理及染毒  11-12
    2.2 MTT 实验  12
    2.3 荧光实时定量 PCR 法分析基因表达水平  12
    2.4 Western blot 免疫印迹蛋白检测法  12-13
  3 统计学方法  13-14
结果  14-19
  1. 亚砷酸钠对 INS-1 细胞活性的影响  14
  2. 亚砷酸钠对 INS-1 细胞基因表达的影响  14-16
    2.1 亚砷酸钠对 INS-1 细胞内 Tp53 基因表达的影响  14-15
    2.2 亚砷酸钠对 INS-1 细胞内 Kras 基因表达的影响  15
    2.3 亚砷酸钠对 INS-1 细胞内 mdm2 基因表达的影响  15-16
  3. 亚砷酸钠对 INS-1 细胞蛋白表达的影响  16-19
    3.1 亚砷酸钠对 INS-1 细胞内突变型 p53 蛋白表达的影响  16-17
    3.2 亚砷酸钠对 INS-1 细胞内 mdm2 蛋白表达的影响  17-19
讨论  19-21
结论  21-22
参考文献  22-26
综述  26-34
  参考文献  30-34
致谢  34-35

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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 卫生基础科学 > 卫生毒理
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