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纳米二氧化钛对青春期小鼠睾酮生成的影响及其机制研究

作　者: 贾芳
导　师: 王俊东
学　校: 山西农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 纳米二氧化钛睾酮精液品质 P450-17α 17β-HSD Cyp19
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

[目的]纳米二氧化钛作为一种遮光剂,在各种化妆品涂料中广泛应用。近来研究表明,纳米颗粒的摄入会导致人睾酮水平发生改变。本文利用RT-PCR, Western-blot,透射电镜,组织切片等方法,结合精子活率,畸形率,血清睾酮含量的变化等情况,综合分析纳米二氧化钛对青春期小鼠雄性生殖的影响,并对其可能机制进行研究。[方法]4周龄雄性昆明小鼠40只,随机分为四组：对照组,低剂量组,中剂量组和高剂量组。自由饮水和采食,每天称重灌胃。具体剂量如下：配置含0.5%Tween80的PBS缓冲液。对照组灌服不含Nano-TiO2的缓冲液,低剂量组灌服含10mg/kgNano-TiO2的缓冲液,中剂量组灌服含50mg/kgNano-TiO2的缓冲液,高剂量组灌服含250mg/kgNano-TiO2的缓冲液。灌胃期间观察记录各组小鼠的活动,被毛及体重等变化情况。42天后,眼球采血,取睾丸组织分别进行RT-PCR, Western-blot,以及组织病理学切片等试验；并结合精子密度,畸形率等变化情况,综合评估纳米二氧化钛对小鼠生殖系统的影响。[结果]1.与对照组相比,各纳米二氧化钛暴露组的小鼠体重均有所下降,高剂量组的体增重与对照组相比明显降低,差异显著。各攻毒组睾丸、附睾的脏器指数与对照组相比,无显著性差异。2.各组小鼠精子密度相比,无显著性差异。与对照组相比,各实验组小鼠精子活率和血清睾酮呈降低趋势,中高剂量组差异显著。与此相反,各攻毒组小鼠畸形率与对照组相比有所上升,其中,中高剂量组差异显著。3.睾丸组织病理学切片结果显示,对照组睾丸组织的曲细精管结构完整,各级生精细胞排列整齐,可见到大量的成熟精子。低剂量组精子细胞有所减少,曲细精管间隙增大。中高剂量组各级生精细胞明显减少,细胞排列不规则,管腔塌陷,曲细精管间有空泡形成。透射电镜结果显示：纳米二氧化钛可导致睾丸线粒体膨大,内部嵴消失。4.应用RT-PCR对小鼠睾丸中StAR、P450-17α、17β-HSD、3p-HSD、Cyp19、P450scc、AR和GATA-4的nRNA表达水平分析得知：与对照组相比,三个剂量组睾丸GATA-4、17β-HSD的mRNA表达均显著降低,中、高剂量组睾丸P450-17a的mRNA表达显著降低；高剂量组Cyp19mRNA表达量显著升高；其它基因mRNA表达无显著性差异。5.用Western-blot对各组小鼠睾丸组织的P450-17α、17β-HSD和Cyp19的蛋白表达量进行分析可知：与对照组相比,高剂量组P450-17a的蛋白表达量显著降低；中、高剂量组17β-HSD的蛋白表达量显著降低。与此相反,Cyp19的蛋白表达量则呈升高的趋势,且中、高剂量组与对照组相比,差异显著。[结论]实验中,睾酮合成过程中的关键基因P450-17α、17β-HSD表达水平在基因和蛋白水平有不同程度的下降；同时,Cyp19的表达显著升高。说明纳米二氧化钛通过两方面的作用影响雄性小鼠的睾酮含量进而导致其生殖功能的下降：一方面,Nano-TiO2抑制了小鼠睾酮合成通路上P450-17a和17β-HSD基因表达来降低睾酮的合成；另一方面,Nano-TiO2刺激了小鼠睾丸中雌激素的生成,导致了雌雄激素比例失调。

全文目录

摘要  6-8
前言  8-10
第一章动物模型的建立及Nano-TiO_2对精液品质的影响  10-18
  1 材料与方法  10-12
    1.1 实验材料  10-11
    1.2 试验方法  11-12
    1.3 数据统计  12
  2 实验结果  12-15
    2.1 Nano-TiO_2粒径透射电子显微镜鉴定  12-13
    2.2 实验小鼠生长状况观察  13
    2.3 实验小鼠生长性能测定结果  13-14
    2.4 实验小鼠脏器指数测定结果  14
    2.5 实验小鼠精液品质测定结果  14-15
  3 分析与讨论  15-17
    3.1 实验模型的建立  15-16
    3.2 Nano-TiO_2暴露对雄性小鼠生长性能和脏器指数的影响  16-17
    3.3 Nano-TiO_2暴露对小鼠精液品质的影响  17
  4 小结  17-18
第二章 Nano-TiO_2对小鼠睾丸组织细胞形态学和血清睾酮含量的影响  18-23
  1 材料与方法  18-20
    1.1 实验材料  18
    1.2 实验方法  18-19
    1.3 数据统计  19-20
  2 实验结果  20-21
    2.1 小鼠睾丸组织形态学观察  20
    2.2 小鼠睾丸组织超微结构观察  20
    2.3 小鼠血清睾酮含量的测定  20-21
  3 分析与讨论  21-22
    3.1 Nano-TiO_2对小鼠睾丸组织形态学的影响  21
    3.2 Nano-TiO_2对小鼠睾丸组织超微结构的影响  21
    3.3 Nano-TiO_2对小鼠血清睾酮含量的影响  21-22
  4 小结  22-23
第三章 Nano-TiO_2对小鼠睾丸中睾酮生成通路相关基因mRNA表达的影响  23-35
  1 材料与方法  23-28
    1.1 实验材料  23-24
    1.2 实验方法  24-28
    1.3 数据统计  28
  2 实验结果  28-31
    2.1 RNA的完整性和纯度  28
    2.2 标准曲线的建立  28-29
    2.3 目的基因和内参基因的扩增动力学曲线和溶解曲线  29
    2.4 目的基因扩增产物的鉴定  29
    2.5 小鼠睾丸中睾酮生成相关基因的定量分析结果  29-31
  3 分析与讨论  31-34
    3.1 Nano-TiO_2对小鼠睾丸中GATA-4 mRNA表达的影响  31-32
    3.2 Nano-TiO_2对小鼠睾丸中StAR、P450scc、3β-HSD、P450-17α、17β-HSDmRNA表达的影响  32-33
    3.3 Nano-TiO_2对小鼠睾丸中Cyp19、AR mRNA表达的影响  33-34
  4 小结  34-35
第四章 Nano-TiO_2对小鼠睾丸P450-17α、17β-HSD、Cyp19蛋白表达的影响  35-41
  1 材料与方法  35-38
    1.1 实验材料  35-36
    1.2 实验方法  36-38
    1.3 数据统计  38
  2 实验结果  38-39
  3 分析与讨论  39-40
  4 小结  40-41
全文结论  41-42
参考文献  42-50
Abstract  50-52
附录  52-56
致谢  56

纳米二氧化钛对青春期小鼠睾酮生成的影响及其机制研究

内容摘要

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