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呋喃西林、呋喃唑酮和孔雀石绿在杂交鳢(斑鳢♀×乌鳢♂)体内残留消除规律研究
作 者: 刘书贵
导 师: 郑光明
学 校: 上海海洋大学
专 业: 水产养殖
关键词: 杂交鳢 孔雀石绿 呋喃西林 呋喃唑酮 代谢物 消除 残留
分类号: S948
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
杂交鳢(斑鳢♀×乌鳢♂)具有良好的杂种优势,所以在鳢科鱼类的养殖过程中占了绝大部分。鳢科鱼类具有肉质细腻、味道鲜美、刺少和出肉率高等特点,深受国内外消费者的喜爱。它还具有补脾利水、去瘀生新、滋补调养等药用价值,可作为创伤、手术和滋补调养的食疗材料。正是由于杂交鳢的这些特点,使得杂交鳢成为了珠江三角洲主要的养殖品种。养殖户也因此开始大规模、高密度的养殖,这种养殖方式会造成鱼体暴发各种疾病。为了追求更高的经济利益,一些养殖户会违规使用某些违禁药物(孔雀石绿、硝基呋喃类)来治疗杂交鳢的水霉和细菌性等疾病,威胁水产品的质量安全,严重影响人类的身心健康。因此本文对孔雀石绿(malachitegreen,MG)及其代谢物隐色孔雀石绿(leucomalachitegreen,LMG)、呋喃西林代谢物—氨基脲(semicarbazide,SEM)和呋喃唑酮代谢物—3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)在杂交鳢肌肉中的残留及消除规律进行了研究,以期确定三种禁药在养殖过程中的监测时段和排查时间,为相关执法部门的监督抽查提供科学指导依据,对杂交鳢的健康养殖和风险隐患排查也具有现实意义。本文在模拟养殖条件下,对杂交鳢苗种(约5cm)体内呋喃西林代谢物氨基脲(semicarbazide,SEM)的残留及消除规律进行了研究。在(30.5±0.5)℃水温条件下,用质量浓度为2mg/L呋喃西林药浴的杂交鳢苗种(约5cm)2d。药浴期间于0.5、1、2、4、8、12、24、48h取样,停止药浴后于0.5、1、2、4、8、12h和1、2、4、8、12、16、20、30、40、50、60、80、100、120d取样,采用液质联用(HPLC-MS)方法测定杂交鳢肌肉中SEM的含量。结果显示,药浴期间0.5~48h,肌肉中SEM质量比从(32.58±2.82)μg/kg逐渐升高至(175.92±18.49)μg/kg;药浴结束后的SEM质量比经测定于1h达到最高,为(108.00±5.86)μg/kg;药浴结束后2~48h,苗种体内SEM质量比维持在(53.60±4.90)~(69.21±5.71)μg/kg之间,48h后显著下降,至60d后已低于检测限0.25μg/kg。鱼体肌肉中SEM的平均消除速率为0.089μg/(kg·h)。结果显示,在该试验条件下,鱼体内SEM可在60d后代谢消除。同时还研究了呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)在杂交鳢苗种(约5cm)体内的残留及消除规律。在30.5±0.5℃水温条件下,对5cm的杂交鳢苗种按体重2%的投喂量投喂含量为3‰的呋喃唑酮药饵,每天投喂3次,连续投喂5d。从投喂开始于0.5h、1h、2h、4h、8h、12h和1、2、4、8、12、16、20、30、40、50、60、80、100、120、150d取样,采用液质联用(HPLC-MS)方法测定肌肉中AOZ的含量。结果表明,从给药开始0.5h~24h,肌肉中AOZ含量从(800.18±8.45)μg·kg-1逐渐升高至(5686.65±11.16)μg·kg-1;在48h~96h,肌肉中的AOZ残留量变化不大,维持在(5420.65±10.81)至(5390.08±7.24)μg·kg-1之间,停止给药后,至2880h(120d)低于检测限0.5μg·kg-1。结果预示,在本实验条件下,杂交鳢体内AOZ可在120d后完全消除。另外,还对大规格(约25cm)杂交鳢和杂交鳢苗种肌肉中的孔雀石绿(MG)和隐色孔雀石绿(LMG)的残留和消除规律进行了研究。分别用质量浓度为200μg/L孔雀石绿药浴杂交鳢苗种2d和对池塘中初始体重为(200±10)g的大规格杂交鳢进行一次性池塘药浴,苗种药浴期间于0.5、1、2、4、8、12、24、48h取样,苗种停止药浴和大规格杂交鳢药浴开始后于1、2、4、8、12、16、20、30、40、50、60、80、100、120、150、180、210、240、270d取样,采用液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定大规格杂交鳢肌肉组织中MG和LMG的残留量和采用高效液相色谱法(HPLC)测定杂交鳢苗种肌肉组织中MG和LMG的残留量。杂交鳢苗种在药浴期间0.5~8h,肌肉中孔雀石绿逐渐升高至(382.09±11.78)μg/kg,随后逐渐呈波动式下降,48~96h,从(31.36±7.13)μg/kg开始大幅度下降(9.73±11.03)μg/kg,直到192h后变化趋于平缓,到50d后杂交鳢肌肉中的孔雀石绿低于检测限。大规格杂交鳢在药浴期间0.5~24h,肌肉中隐色孔雀石绿随时间逐渐增加至(4865.71±11.75)μg/kg,停止药浴后4~12h,隐色孔雀石绿的残留量变化不大,介于(1452.05±10.78)~(1476.68±9.46)μg/kg之间,12h后隐色孔雀石绿的残留量骤降,40d时隐色孔雀石绿的残留量低于检测限。大规格杂交鳢药浴0.5h~96h期间,孔雀石绿(MG)和隐色孔雀石绿(LMG)在杂交鳢肌肉中的残留量不断波动式升高,分别达到(543.77±22.14)μg/kg和(220.51±7.93)μg/kg。从96h之后MG呈现下降趋势,到1920h后残留量低于检测限0.5μg/kg。在288h~480h范围内LMG的残留量基本维持在(73.72±4.85)~(70.33±9.27)μg/kg之间,1920h时LMG的残留量急剧下降至(2.25±0.25)μg/kg,至5040h已低于检测限0.5μg/kg。结果表明,隐色孔雀石绿(LMG)比孔雀石绿(MG)代谢时间长,可以作为检测孔雀石绿(MG)是否在养殖业被使用的标志物。
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全文目录
摘要 4-8 ABSTRACT 8-17 引言 17-29 1 杂交鳢概述 17 2 三种禁用药物的概述 17-21 2.1 呋喃西林及其代谢物 17-18 2.2 呋喃唑酮及其代谢物 18-19 2.3 孔雀石绿及其代谢物 19-21 2.3.1 孔雀石绿的应用及毒副作用 20-21 2.3.1.1 驱虫剂 20 2.3.1.2 杀菌剂 20 2.3.1.3 孔雀石绿的毒副作用 20-21 3 三种禁用药物及其代谢物的研究现状 21-22 4 目前三种禁用药物的检测方法 22-26 4.1 硝基呋喃类(呋喃西林和呋喃唑酮)代谢物的检测方法 22-24 4.1.1 酶联免疫吸附试验(ELISA)法 22-23 4.1.2 分光光度法 23 4.1.3 薄层色谱法 23 4.1.4 高效液相色谱法 23-24 4.1.5 高效液相色谱-串联质谱法 24 4.2 孔雀石绿及其代谢物的检测方法 24-26 4.2.1 普通分光光度法 24-25 4.2.2 毛细管电泳法 25 4.2.3 荧光检测法 25 4.2.4 高效液相色谱法及高效液相色谱串联质谱法 25-26 5 研究目的意义 26-27 6 技术路线 27-29 第一章 呋喃西林代谢物在杂交鳢(斑鳢♀×乌鳢♂)体内的残留消除规律研究 29-37 1 材料与方法 29-32 1.1 试验材料与养殖场所 29 1.2 试剂与药品 29 1.3 主要试验仪器和设备 29-30 1.4 试验设计 30 1.5 肌肉中SEM的测定 30-31 1.5.1 样品预处理 30 1.5.2 水解和衍生化 30 1.5.3 提取净化 30-31 1.6 色谱及质谱条件 31 1.6.1 色谱条件 31 1.6.2 质谱条件 31 1.7 标准工作曲线绘制与测定 31-32 1.8 回收率及精密度的测定 32 1.9 结果计算 32 2 结果与分析 32-35 2.1 试验过程中呋喃西林对杂交鳢苗种行为的影响 32-33 2.2 呋喃西林代谢物检测色谱图分析 33-34 2.3 标准曲线与灵敏度 34 2.4 回收率与精密度 34 2.5 药浴过程中SEM在杂交鳢肌肉中的残留量 34-35 2.6 消除过程中SEM在杂交鳢肌肉中的残留量 35 3 讨论 35-37 3.1 药物处理方式和试验条件 35 3.2 试验期间杂交鳢体内SEM的残留量分析 35-37 第二章 呋喃唑酮代谢物在杂交鳢(斑鳢♀×乌鳢♂)体内的残留消除规律研究 37-45 1 材料与方法 37-40 1.1 实验材料与养殖场所 37 1.2 试剂与药品 37-38 1.3 主要试验仪器和设备 38 1.4 实验设计 38 1.5 肌肉中AOZ的测定 38-39 1.5.1 样品预处理 38 1.5.2 水解和衍生化 38-39 1.5.3 提取净化 39 1.6 色谱及质谱条件 39-40 1.6.1 色谱条件:23 39 1.6.2 质谱条件:23 39-40 1.7 标准工作曲线绘制与测定 40 1.8 回收率及精密度的测定 40 2 结果与分析 40-43 2.1 AOZ检测色谱图分析 40-42 2.2 标准曲线及灵敏度26 42 2.3 回收率及精密度26 42 2.4 投喂药饵期间AOZ在杂交鳢肌肉中的积累残留量26 42-43 2.5 投喂药饵结束后消除过程中AOZ在杂交鳢肌肉中的残留量 43 3 讨论 43-45 3.1 药物处理方式和实验条件 43-44 3.2 实验过程中杂交鳢体内AOZ的残留量分析 44-45 第三章 孔雀石绿及其代谢物在杂交鳢(斑鳢♀×乌鳢♂)体内的残留消除规律研究 45-57 1 材料与方法 45-49 1.1 材料 45-46 1.1.1 试验材料与养殖场所 45 1.1.2 试剂与药品 45 1.1.3 主要试验仪器和设备 45-46 1.2 试验设计 46 1.3 方法 46-49 1.3.1 标准溶液配制 46-47 1.3.2 高效液相色谱串联质谱法 47-48 1.3.2.1 样品提取 47 1.3.2.2 样品净化 47 1.3.2.3 色谱条件 47-48 1.3.2.4 质谱条件 48 1.3.3 高效液相色谱法 48-49 1.3.3.1 样品前处理 48-49 1.3.3.2 色谱条件 49 1.3.4 标准工作曲线的绘制与测定 49 1.3.5 回收率及精密度的测定 49 2 结果与分析 49-55 2.1 大规格杂交鳢肌肉中孔雀石绿及隐色孔雀石绿检测色谱图 49-52 2.2 杂交鳢苗种肌肉中孔雀石绿检测色谱图 52 2.3 标准曲线与线性范围 52-53 2.4 回收率和精密度 53 2.5 孔雀石绿和隐色孔雀石绿在大规格杂交鳢肌肉中的残留量分析 53-54 2.6 药浴过程中孔雀石绿和隐色孔雀石绿在杂交鳢苗种肌肉中的残留量分析 54 2.7 消除过程中孔雀石绿和隐色孔雀石绿在杂交鳢苗种肌肉中的残留量分析 54-55 3 讨论 55-57 总结 57-58 参考文献 58-63 附录 缩略语表 63-64 已完成文章 64-65 致谢 65
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中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产保护学 > 水产药物学、药理学
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