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圈养普氏野马幼体发育及母幼生理参数的非损伤性研究

作　者: 葛兴芳
导　师: 胡德夫
学　校: 北京林业大学
专　业: 野生动植物保护与利用
关键词: 普氏野马非损伤行为免疫球蛋白甲状腺激素T3 类固醇激素稀释比例
分类号: S865
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

普氏野马是世界珍稀濒危保护物种,一直以来对其的非损伤性研究都是保护生物学家关注的重点。本研究于2011年5-8月在新疆野马中心连续系统采集了5个家族群25匹普氏野马的新鲜粪样通过酶联免疫吸附法(EIA).和放射性免疫方法(RIA)测定粪便免疫球蛋白、甲状腺激素、类固醇激素等,并结合目标取样法与扫描取样法对5匹幼体出生后3个月内的行为持续时间和频次以及雌马105丧驹后的行为进行观察和记录,从行为、免疫、代谢生理角度揭示圈养普氏野马幼体发育过程中的关键时期、带驹母马哺乳期的免疫生理以及丧驹母马的应激、免疫、繁殖和代谢生理,拟为其人工管护提供依据。主要研究结果如下：1.幼体在刚出生后不到一个小时就可以站立奔跑,这与其野外的生活习性相符；幼体在出生后的3个月内,卧休、站立、运动、吮乳行为逐月显著减少,食草、饮水和其他行为显著增加,并且在第一个月幼体紧随母体,基本不与其他个体接触,直到第二个月随着幼体吮乳减少食草增加,对母体依赖减少,并开始逐渐接触其他个体尤其是同龄的其他个体。结果表明幼体出生后的一个月是母幼关系维系最紧密的时期,能量和营养主要来自母乳,从第二个月开始幼体进入社会化阶段,能量更多的依赖食草摄入。高温条件下幼体的卧休、站立、饮水行为增加,采食和其他行为减少,表明温度对幼体的行为有一定的影响,幼体会减少产热多的行为以适应机体能量代谢。2.幼体出生后3个月内的粪便特征也存在显著变化,具体表现为：幼体刚出生时粪便如人类婴儿粪便,呈浅黄色黏性细条状,之后2-3周粪便仍基本呈条状,但颜色有所改变,含草量增加,整体色深且有黏性,除幼162个体外,其他个体在出生4周后粪便除大小和排出量外成分基本已于成体无异。因此从粪便特征的变化情况也可以看出,幼体在出生后吮乳逐渐减少,采食逐渐增加,说明幼体前4周营养和能量主要来自母乳,母体依赖较大,之后逐渐以食草为主,对母体依赖减少。3.幼体出生后3个月内粪便IgA和IgM水平发生很大变化,并且变化趋势相似。均在前2周水平较高,第3周降到最低,第4周快速上升到一较高水平,后波动下降,在11-12周趋于稳定。表明幼体出生后的前两周主要靠吸收母乳免疫球蛋白快速建立被动免疫,但由于其肠道黏膜细胞逐渐关闭,这种被动免疫在第3周降到最低,而此时自身主动免疫尚未完善,因此幼体出生后的前两个月尤其是第三周前后是幼体极易发生感染需要特别管护的时期。4.母马生产后前2周粪便IgA和IgM水平开始下降,在第3周降到最低,之后开始上升并呈波动变化,在12周恢复到接近第10周的水平。与幼体的粪便IgA和IgM水平变化趋势类似,说明哺乳是母体粪便IgA和IgM变化的重要因素,母马的免疫水平会影响幼体。5.幼体162自出生后其粪便IgA和IgM的水平就低于其他个体同时期的水平,被动免疫达到最高的时间也比其他幼体晚一周,而且达到稳定后的水平也远低于其他个体,而母马162生产后粪便IgA和IgM水平与其他带驹母马个体相似,因此推测幼体162后来死亡的原因可能是早期被动免疫和主动免疫建立失败所致。6.普氏野马不同年龄段的粪便T3水平呈现出幼体>亚成体(出生后1-2年)>成体雄性>成体雌性(带驹),各年龄段之间呈现极显著差异(p<0.01),说明不同年龄段的野马具有不同的生理代谢水平,其中雌性成体(非带驹)高于亚成体而低于幼体,基于同样的原因,成体雄性也高于带驹雌性,说明处于6-7月交配盛期的非带驹雌性和雄性个体受到繁殖因素的强烈影响,生理代谢水平较高；幼体出生后第一周T3水平较低,第二周左右迅速升到最高,此后处于波动下降,至出生后两个月逐渐下降并趋于较为稳定水平,说明普氏野马幼体在出生后的2个月处于快速发育阶段,是能量、营养需求及人工管护的关键阶段。本研究表明,普氏野马粪便T3能够反映该物种的生理代谢状态,是一个很好的非损伤性检测指标。7.在采用非损伤性方法研究动物粪便类固醇激素时,多采用甲醇保存提取的激素。本研究对普氏野马粪便性类固醇激素提取样品中甲醇的浓度对酶联免疫方法检测时的影响做了研究,结果显示,甲醇对酶标抗原的结合率有很大的影响,应在检测前稀释适当的倍数,具体的：检测T,样本稀释15倍时；检测E2,样本稀释30-50倍时；检测P,样本稀释15倍时,B/Bo(%)最接近50%。8.雌马105丧驹当天很暴躁,守护幼体、攻击人、滴奶、不采食,第二天便与公马随行,丧驹3个月内观察到其与头马的交配次数明显高于同群其他雌性个体；粪便皮质醇在丧驹第2天急剧升高,第5天升到一峰值,之后快速下降在第14天降到最低(接近丧驹当天水平),随后一直呈不规则的波动变化；粪便IgA和IgM均在丧驹第3天升到最高,后波动下降在20-30天降到接近丧驹当天水平,之后又波动变化,IgA在丧驹第3个月达到稳定；丧驹第2天粪便E2和P急剧下降到较低水平,之后经过一个较小的波动后迅速上升开始不规则的周期性波动；粪便T3在丧驹初期发生急剧变化.在第14天开始有所上升并呈不稳定的小范围波动。结果表明雌马105对丧驹的应激反应较大,丧驹后机体迅速从生理和行为做了调整,较快主动的开始了下一次繁殖。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
目录  10-13
英文缩略表  13-14
1. 引言  14-29
  1.1 普氏野马的生物学特征及历史分布  14-15
  1.2 普氏野马生物学研究概况  15-19
    1.2.1 生理学研究  15-17
    1.2.2 遗传学研究  17
    1.2.3 行为学研究  17-18
    1.2.4 疾病学研究  18
    1.2.5 新疆野马繁育研究中心概况  18-19
  1.3 野生动物非损伤性取样方法的研究  19-20
  1.4 动物粪便糖皮质激素及其代谢产物的研究  20-22
  1.5 动物粪便性激素及其代谢产物的研究  22-24
  1.6 动物粪便甲状腺激素的研究  24-25
  1.7 动物胃肠道分泌型免疫球蛋白的研究  25-28
  1.8 本研究的目的和意义  28-29
2. 普氏野马幼体出生后1-3月龄行为的研究  29-39
  2.1 研究对象、材料和方法  29-31
    2.1.1 研究对象  29-30
    2.1.2 研究地点  30
    2.1.3 行为观察  30-31
    2.1.4 数据分析  31
  2.2 结果  31-36
    2.2.1 幼体刚出生后的行为描述  31-32
    2.2.2 幼体早期发育过程的主要行为变化  32-35
    2.2.3 温度对幼体行为的影响  35-36
  2.3 讨论  36-39
    2.3.1 幼体早期发育过程的主要行为变化  36-37
    2.3.2 温度对幼体行为的影响  37-38
    2.3.3 幼体早期发育过程的一种特殊行为---食粪行为  38-39
3. 普氏野马幼体早期发育过程中胃肠道黏膜免疫水平的变化  39-48
  3.1 研究对象、材料和方法  39-41
    3.1.1 采样对象  39
    3.1.2 主要仪器设备  39-40
    3.1.3 粪便采集和提取、测定方法  40-41
    3.1.4 数据统计与分析  41
  3.2 结果与分析  41-44
    3.2.1 幼体出生后3个月内粪样外部特征变化  41-42
    3.2.2 幼体出生3个月内粪便IgA的变化  42-43
    3.2.3 幼体出生3个月内粪便IgM的变化  43-44
    3.2.4 幼体162出生3个月内粪便IgA和IgM的变化  44
  3.3 讨论  44-48
    3.3.1 幼体获得被动免疫和建立主动免疫的过程  44-46
    3.3.2 幼体主动免疫建立过程中IgA和IgM的作用  46-48
4. 普氏野马幼体早期发育过程中母体免疫球蛋白的变化  48-53
  4.1 研究对象、材料和方法  48-49
    4.1.1 采样对象  48
    4.1.2 主要仪器设备  48
    4.1.3 粪便采集和提取、测定  48-49
    4.1.4 数据统计与分析  49
  4.2 结果  49-51
    4.2.1 母马生产后3个月内粪便IgA的变化  49
    4.2.2 母马生产后3个月内粪便IgM的变化  49-50
    4.2.3 母马162生产后3个月内粪便IgA和IgM的变化  50-51
  4.3 讨论  51-53
    4.3.1 母马产后免疫球蛋白对幼体免疫建立过程的影响  51-53
5. 普氏野马粪便甲状腺素T3水平的年龄、性别及繁殖状态的效应  53-60
  5.1. 研究对象  53-55
  5.2. 研究方法  55
    5.2.1 粪便采集和提取、测定  55
    5.2.2 数据统计与分析  55
  5.3. 结果  55-57
    5.3.1 幼体早期发育过程中粪便T3的变化  55-57
    5.3.2 不同年龄段个体粪便T3的比较  57
  5.4. 讨论  57-60
    5.4.1 粪便T3水平的年龄效应  57-59
    5.4.2 粪便T3水平的繁殖和性别效应  59-60
6. 酶免法检测普氏野马粪便性类固醇激素的最佳稀释比例  60-65
  6.1 研究对象、材料和方法  60-61
    6.1.1 采样对象  60
    6.1.2 激素提取和测定方法  60-61
    6.1.3 数据分析  61
  6.2 结果  61-63
  6.3 讨论  63-65
7. 丧驹母马的应激、免疫、繁殖和代谢生理的个案追踪研究  65-74
  7.1 研究对象、材料和方法  65-67
    7.1.1 采样对象及样品采集  65
    7.1.2 主要仪器设备  65-66
    7.1.3 样品的提取和测定  66
    7.1.4 数据统计与分析  66-67
  7.2 结果  67-71
    7.2.1 雌105丧驹后的行为表现  67
    7.2.2 雌105丧驹后粪便皮质醇变化  67-68
    7.2.3 雌105丧驹后粪便IgA、IgM变化  68-69
    7.2.4 雌105丧驹后粪便T3的变化  69-70
    7.2.5 雌105丧驹后粪便雌二醇和孕酮的变化  70-71
  7.3 讨论  71-74
    7.3.1 丧驹对野马应激的影响  71-72
    7.3.2 丧驹对母马粪便IgA和IgM的影响  72
    7.3.3 母马丧驹后的代谢和繁殖调整  72-74
8. 结论  74-75
参考文献  75-100
个人简介  100-101
导师简介  101-102
成果清单  102-103
致谢  103

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