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VC、VE及Gln复合营养素对大鼠抗冷应激能力的影响及最佳剂量的筛选

作 者: 刘丛
导 师: 李士泽
学 校: 黑龙江八一农垦大学
专 业: 兽医
关键词: 冷应激 复合营养素 大鼠 主成分分析
分类号: S865.12
类 型: 硕士论文
年 份: 2014年
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内容摘要


本试验旨在分析低温条件下,日粮中联合添加不同水平的VC、VE以及Gln复合营养素大鼠冷应激中的作用,确定其适宜添加量,对新型饲料复合营养素的研发提供基础数据,为更深层次的揭示寒冷环境对动物应激反应和对抗低温损伤提供更多的理论依据。试验对象选取12周龄左右,体质量(200±10)g清洁级健康雌性Wistar大鼠110只,随机分为冷应激对照组、常温对照组和9个复合营养素试验组,每组10只,根据L9(34)正交试验设计表确定每组灌胃剂量。正常饲养温度设置为21±0.05℃,湿度40±0.1%,采食饮水不限。预饲一周后对大鼠进行灌胃,试验组为VC、VE、Gln复合营养素,两对照组灌等体积水。伺服一周后利用人工智能气候室将温度迅速降至11±1℃,24h后腹主动脉采血,分离血清和淋巴细胞。采用双抗夹心Elisa方法检测血清激素去甲肾上腺素(NE)、血清生化指标(SOD、GSH-PX、MDA、T-AOC)和血清免疫指标(IgA、IgG、IgM、IL-2)含量的变化;采用q-PCR及Western Blotting方法检测HSP70mRNA及蛋白表达水平的变化;采用主成分分析(PCA)和综合平衡法对各指标数据进行分析筛选,确定复合营养素的最佳配伍剂量。试验结果如下:(1)VC、VE及Gln复合营养素对冷应激大鼠血清NE和抗氧化指标的影响经24h低温应激后大鼠血清NE含量普遍上升,即冷应激组与常温组相比差异极显著(p<0.01),试验组与对照组相比,第6组与常温组无明显差异性变化,其他试验组与冷应激组之间差异极显著(p<0.01)。血清氧化还原指标SOD浓度变化:冷应激组与常温组相比,含量极显著下降(p<0.01),试验组与冷应激组相比普遍有上升趋势;其中,2、3、8组无明显差异变化,4和7、5和6组间也无显著性差异。血清抗氧化指标GSH-PX浓度变化:冷应激组与常温组相比,含量极显著下降(p<0.01);试验组与冷应激组相比普遍有升高趋势,其中,8组、9组与常温对照组差异显著(p<0.05)。血清总抗氧化能力T-AOC浓度变化:冷应激组与常温组相比,血清含量极显著下降(p<0.01);试验组与冷应激组相比,血清浓度均有上升趋势;其中,1、2、3、4、5、8、9组间不存在差异,与冷应激对照组相比差异显著(p<0.05)。血清氧化还原指标MDA浓度变化:冷应激组与常温组相比,含量极显著升高(p<0.01),试验组与冷应激组相比,血清浓度有下降趋势;第5组与常温对照组无特异性差异,其余各组与冷应激对照组差异极显著(p<0.01)。(2)VC、VE及Gln复合营养素对冷应激大鼠血清免疫指标的影响细胞因子IL-2血清含量:冷应激组与常温组相比,血清浓度含量极显著降低(p<0.01),试验组与冷应激组相比,血清浓度普遍有上升趋势;其中,第2组与冷应激组不存在差异显著性,第6组与冷应激对照组存在显著性差异(p<0.05)。血清免疫球蛋白IgA浓度变化:冷应激组与常温组以及各试验组相比,含量差异极显著下降(p<0.01),试验组与冷应激组相比,血清免疫球蛋白浓度普遍有上升趋势;其中,第6、7组无明显差异,1、3、4组有显著性差异,其他各组间存在极显著性变化(p<0.05);关于血清IgG含量,第8组与常温对照组无特异性差异,3与5组差异显著(p<0.05),6与7组差异不显著,其他各组含量差异极显著不同;关于血清IgM的含量:4、6与冷应激组相比,血清含量无明显差异性,1、7、8组与冷应激组比差异显著性升高(p<0.05),3、5与常温组相比,血清含量呈现差异性显著变化(p<0.05)。(3)VC、VE及Gln复合营养素对冷应激大鼠淋巴细胞HSP70表达的影响HSP70q-PCR检测结果:冷应激对照组HSP70mRNA转录量与常温组相比极显著升高(p<0.01),试验组与冷应激组相比,有下降趋势。其中,6、9、8组与常温对照组相比无明显变化,其他各组与常温对照组相比差异极显著(p<0.05)。经过冷应激后,HSP70表达变化为:冷应激对照组与常温对照组相比表达量极显著升高(P<0.01),与q-PCR检测结果相一致,其中,8、9组与常温对照组相比呈显著性差异变化(P<0.05),其他组与常温对照组相比差异极显著(P<0.01),降低趋势明显。(4)抗应激复合添加剂最优配伍剂量的筛选采用主成分分析(PCA)与综合平衡法相结合,利用SPSS19.0,经过对11项指标原始数据进行PCA分析与综合平衡法验证,最终确定复合营养素最佳剂量:VC:300mg/kg,VE:100mg/kg,Gln:2500mg/kg。结论如下:抗冷应激复合营养素对降低大鼠冷应激敏感性、抵抗冷应激作用具有较理想的保护效果。四种添加剂饲料添加的最佳配伍剂量为VC:300mg/kg,VE:100mg/kg,Gln:2500mg/kg。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-13
前言  13-14
第一章 文献综述  14-24
  1.1 冷应激对动物机体影响的研究进展  14-17
    1.1.1 冷应激的反应机制及其分类  14-15
    1.1.2 冷应激对机体内分泌的影响  15
    1.1.3 冷应激对机体自由基产生的影响  15-16
    1.1.4 冷应激对机体免疫的影响  16-17
  1.2 复合营养素对抗冷应激作用的研究进展  17-21
    1.2.1 维生素 C 的抗冷应激作用  18-19
    1.2.2 维生素 E 的抗冷应激作用  19-20
    1.2.3 谷氨酰胺的抗冷应激作用  20-21
  1.3 HSP70 对抗冷应激的研究进展  21-24
    1.3.1 HSP70 的家族概况  21-22
    1.3.2 HSP70 的生物学功能  22-24
第二章 VC、VE 及 Gln 复合营养素对大鼠血清生化指标的影响  24-32
  2.1 材料与方法  24-26
    2.1.1 材料  24-25
    2.1.2 方法  25-26
  2.2 结果  26-28
  2.3 讨论  28-29
  2.4 小结  29-32
第三章 VC、VE 及 Gln 复合营养素对大鼠血清免疫指标的影响  32-38
  3.1 材料与方法  32-34
    3.1.1 材料  32-33
    3.1.2 方法  33-34
  3.2 结果  34-35
  3.3 讨论  35-36
    3.3.1 VC、VE 及 Gln 复合营养素对大鼠血清细胞因子(IL-2)的影响  35
    3.3.2 VC、VE 及 Gln 复合营养素对大鼠血清免疫球蛋白的影响  35-36
  3.4 小结  36-38
第四章 VC、VE 及 Gln 复合营养素对大鼠淋巴细胞 HSP70 表达的影响  38-50
  4.1 材料与方法  38-46
    4.1.1 材料  38-40
    4.1.2 方法  40
    4.1.3 大鼠外周血淋巴细胞的分离  40
    4.1.4 淋巴细胞总 RNA 的提取  40-41
    4.1.5 总 RNA 反转录 cDNA 模版及鉴定  41-42
    4.1.6 HSP70 基因的质粒提取及鉴定  42-43
    4.1.7 大鼠外周血淋巴细胞 HSP70 的 mRNA 的检测  43-44
    4.1.8 大鼠外周血淋巴细胞总蛋白的提取及鉴定  44-45
    4.1.9 大鼠外周血淋巴细胞 HSP70 的 Western Blot 检测  45-46
  4.2 结果  46-48
    4.2.1 大鼠淋巴细胞总 RNA 的提取结果  46-47
    4.2.2 HSP70 基因质粒鉴定结果  47
    4.2.3 HSP70 表达量及其 mRNA 表达水平检测结果  47-48
  4.3 讨论  48-49
  4.4 小结  49-50
第五章 复合营养素抵御低温应激最佳添加剂量的筛选  50-58
  5.1 原始数据的标准化  50-51
  5.2 相关系数分析  51
  5.3 主成分的确定  51-52
  5.4 主成分荷载值的计算  52-53
  5.5 主成分得分计算  53-54
  5.6 综合平衡法分析结果  54-55
  5.7 讨论  55-56
  5.8 小结  56-58
结论  58-60
参考文献  60-68
致谢  68-70
附录  70-72
个人简历  72-73

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 狩猎、野生动物驯养 > 各种野生动物驯养 > 实验用动物 > 大白鼠
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