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鸭坦布苏病毒病发病模型的建立及免疫抗体持续期的测定
作 者: 周晓波
导 师: 李银
学 校: 南京农业大学
专 业: 预防兽医学
关键词: 鸭 坦布苏病毒 攻毒量 抗体保护临界值 免疫持续期
分类号: S858.32
类 型: 硕士论文
年 份: 2012年
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内容摘要
2010年4月以来,江苏、浙江、福建、安徽、江西和河北等省的鸭发生了一种以产蛋率、采食量显著下降,具有脑炎样神经症状的传染病,研究表明引起该病的病原为不同于现有资料报道的一种新的黄病毒,即坦布苏病毒。该病毒感染率高达100%,发病率和死亡率在5%~30%之间,产蛋率下降40%~50%,给鸭鹅养殖业造成巨大的经济损失。为了研究该病发病机理,本试验建立了其发病模型;为了更好地防控该疫病的爆发,还进行了攻毒保护性试验和免疫抗体持续期监测。将168只35日龄无坦布苏病毒感染的樱桃谷肉鸭随机分成7组,每组24只,其中1~6组分别以不同含量的鹅源坦布苏JS804株病毒肌肉注射进行攻毒,对照组肌肉注射相同剂量的PBS。攻毒后每天观察临床症状。分别于攻毒后2d、4d、6d、8d、13d、20d每组随机取4只攻毒鸭扑杀,分别取每只鸭各脏器样品2份,一份放-20℃冻存,用于多重RT-PCR检测病毒;另一份用4%多聚甲醛固定,用于免疫组织化学分析和组织病理学分析。临床症状观察:试验鸭于攻毒后腿瘫、头颈扭曲、行走不稳。剖检变化:各主要脏器均出现病变,其中以脾脏、肝脏、脑最为明显。套氏RT-PCR结果:攻毒后第8天各脏器病毒阳性检出率最高,其中以脾脏检出率最高;通过对不同攻毒量各组的检测,确定鸭的攻毒量为1.6×106TCID50。HE染色病理切片观察:脑神经元细胞变性、坏死;肝细胞水泡变性、肝小叶结构破坏;脾脏淋巴细胞变性、坏死,红、白髓界限不清。免疫组化定位发现:心肌纤维细胞、脾脏生发中心、肺泡上皮细胞、肾小球上皮细胞、脑血管内皮细胞、肝细胞均有棕黄色阳性信号。将50只14日龄无坦布苏病毒感染的樱桃谷肉鸭随机平分成5组,每组10只,其中1~4组分别以不同抗原含量的坦布苏病毒病灭活疫苗肌肉注射进行免疫,对照组肌肉注射相同剂量的PBS。免疫后21天采血,测定每一只鸭的抗体水平,用第二章已确定攻毒量(1.6×106TCID50)的鹅源坦布苏JS804株病毒进行攻毒,攻毒后8天扑杀所有试验鸭,多重RT-PCR检测鸭脾脏中有无坦布苏病毒。结果:当抗体效价是29时,攻毒保护率达88.9%,鸭坦布苏病毒抗体保护临界值为29;同时确定了灭活疫苗最小免疫量是3.8×105TCID50。30只23日龄无坦布苏病毒感染的樱桃谷肉鸭随机均分成3组(单次免疫组、两次免疫组、对照组),免疫后定期采血测定抗体效价。结果表明两次免疫效果较单次免疫好。20只23日龄无坦布苏病毒感染的樱桃谷肉鸭随机均分成1、2组(免疫组和对照组),20只54日龄无坦布苏病毒感染的樱桃谷肉鸭随机均分成3、4组(免疫组和对照组),免疫后定期测定抗体效价,监测维持期。发现抗体效价半年能维持在较高的水平,且两种日龄首免鸭无明显差异。
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全文目录
摘要 7-9 ABSTRACT 9-11 英文缩略表 11-13 第一篇 文献综述 13-35 第一章 鸭坦布苏病毒的研究进展 13-35 1 引言 13-14 2 病原学 14-15 2.1 基因结构 14-15 2.2 理化特征与培养特性 15 3 流行病学 15-17 4 临床症状与病理变化 17-19 4.1 临床症状 17-18 4.2 病理变化 18-19 5 实验室诊断方法 19-23 5.1 病原检测 19-20 5.2 免疫组化方法 20-21 5.3 间接免疫荧光试验 21-22 5.4 酶联免疫吸附试验 22 5.5 蚀斑减少中和试验 22 5.6 分子生物学检测 22-23 6 疫苗相关的研究 23-26 6.1 灭活疫苗 23 6.2 减毒活疫苗 23-24 6.3 DNA疫苗 24-25 6.4 亚单位疫苗 25 6.5 嵌合疫苗 25-26 7 实验动物模型相关研究 26-27 8 研究目的和意义 27-28 参考文献 28-35 第二篇 试验研究 35-115 第二章 鸭坦布苏病毒病发病模型的建立 35-97 摘要 35 1 材料 35-36 1.1 毒株与实验动物 35 1.2 主要试剂 35-36 1.3 主要仪器设备 36 2 方法 36-41 2.1 病毒的增殖与TCID_(50)的测定 36 2.2 试验动物分组与攻毒 36-37 2.3 临床症状及剖检病变的观察 37 2.4 多重RT-PCR检测 37-39 2.5 主要脏器组织病理学变化 39-40 2.6 主要脏器免疫组织化学(IHC)分析 40-41 3 结果 41-91 3.1 病毒的滴度 41 3.2 临床症状及剖检变化 41-44 3.3 多重RT-PCR检测 44-84 3.4 病理组织学变化 84-88 3.5 免疫组织化学分析 88-91 4 讨论 91-95 4.1 试验动物及日龄的选择 91 4.2 接种途径、剂量及毒株的选择 91 4.3 免疫组织化学分析 91-92 4.4 鸭坦布苏病毒病发病模型的建立 92-95 参考文献 95-96 ABSTRACT 96-97 第三章 疫苗免疫保护效果的评价 97-107 摘要 97 1 材料 97-98 1.1 疫苗、毒株与实验动物 97 1.2 主要试剂 97 1.3 主要仪器设备 97-98 2 方法 98-100 2.1 病毒增殖与TCID_(50)的测定 98 2.2 包被抗原的制备 98 2.3 间接ELISA检测抗体滴度操作方法与结果判定 98-99 2.4 实验动物分组与免疫 99 2.5 采血与攻毒 99 2.6 临床观察与剖检变化 99 2.7 套氏RT-PCR检测 99-100 2.8 数据处理 100 3 结果 100-102 3.1 临床观察及剖检变化 100 3.2 抗体效价的测定 100-101 3.3 免疫保护效果分析 101-102 4 讨论 102-104 参考文献 104-105 ABSTRACT 105-107 第四章 抗体持续期的测定 107-115 摘要 107 1 材料 107-108 1.1 疫苗与实验动物 107 1.2 主要试剂 107 1.3 主要仪器设备 107-108 2 方法 108 2.1 免疫程序试验 108 2.2 抗体持续期试验 108 3 结果 108-110 3.1 免疫程序 108-109 3.2 抗体持续期 109-110 4 讨论 110-113 4.1 免疫程序的选择 111-112 4.2 抗体持续期的监测 112-113 参考文献 113-114 ABSTRACT 114-115 全文总结 115-117 附录 117-121 致谢 121
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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家禽 > 鸭
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