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鸭黄病毒灭活油乳苗的制备及免疫效力测定

作　者: 李振华
导　师: 刘凤军
学　校: 河南科技大学
专　业: 兽医
关键词: 鸭黄病毒 分离 鉴定 灭活油乳苗 免疫效力 田间试验
分类号: S858.32
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


鸭黄病毒病是由鸭黄病毒（DFV）引起的，是一种以种鸭、蛋鸭产蛋量下降为主要特征的急性、高度接触性的传染性疾病。自2010年该病爆发以来，给我国养鸭业带来了巨大的经济损失。该病是一种新发传染病，因此该病的致病性、流行病学特征以及防制工作等方面的研究尚在进行中。为减少该病的危害，本试验从河南地区分离出鸭黄病毒毒株，并在此基础上制备鸭黄病毒灭活油乳苗，然后对疫苗的免疫效力进行分析，以期为鸭黄病毒病的防制工作提供一定的参考数据。主要试验内容分为以下三个方面：1、鸭黄病毒的分离及鉴定采集河南地区发病鸭厂的疑似鸭黄病毒感染病料，之后进行病毒的鸭胚分离、生物学鉴定及PCR鉴定。结果分离获得1株鸭黄病毒毒株，基因测序结果与Genbank上已公布鸭黄病毒毒株序列同源性达到95%以上，测得的E囊膜蛋白的基因序列已提交GenBank（JQ669731），该毒株的获得也为下一步疫苗的制备奠定了基础。2、鸭黄病毒灭活油乳苗的制备及免疫效力分析本试验应用分离的鸭黄病毒，经鸭胚增殖，测得病毒含量5×102.25ELD50/mL，之后按照常规方法制备灭活油乳苗。将10日龄雏鸭分成4组，每组20只，分别免疫0.2mL，0.5mL，0.8mL疫苗，以及PBS对照组。通过间接ELISA方法检测鸭血清中抗体水平，结果显示，在免疫后7至21d内，0.5mL免疫组抗体水平与对照组相比差异极显著（p<0.01）；免疫21d时，E玫瑰花环试验检测鸭血清中T淋巴细胞数量，结果为0.5mL组玫瑰花环形成率为（67.09±1.23）%，极显著（p<0.01）于对照组（51.86±1.14）%；攻毒保护试验中0.2mL组免疫保护率为80%，0.5mL和0.8mL组疫苗保护率为100%，对照组发病鸭均表现出鸭黄病毒感染症状，其中3只死亡。因此，本试验制备的鸭黄病毒灭活油乳苗能够提高鸭体内的抗体和T淋巴细胞水平，为进一步研究鸭黄病毒疫苗提供了一定的实验数据。3、鸭黄病毒灭活油乳苗的田间试验本试验将鸭黄病毒灭活油乳苗进行小规模的生产应用。用制备的鸭黄病毒灭活油乳苗分别免疫雏鸭和初产蛋鸭，在免疫0、14、28、42d采集血清，ELISA法检测抗体水平，结果显示，疫苗能够明显提高鸭机体抗体水平，雏鸭免疫组和蛋鸭免疫组与对照组相比差异均极显著（p＜0.01）。因此，本试验结果证明鸭黄病毒灭活油乳苗能够明显提高机体免疫力，为疫苗的商品化应用奠定了基础。

全文目录


摘要  2-4
ABSTRACT  4-8
第1章 文献综述  8-16
  1.1 黄病毒与黄病毒病  9-11
    1.1.1 黄病毒简介  9
    1.1.2 黄病毒引起的人类疾病  9-11
    1.1.3 黄病毒引起的家禽疾病  11
  1.2 鸭黄病毒研究进展  11-15
    1.2.1 鸭黄病毒的生物学特性  11-12
    1.2.2 鸭黄病毒流行病学  12-13
    1.2.3 鸭黄病毒感染的临床症状与病理变化  13
    1.2.4 鸭黄病毒感染的诊断方法  13-14
    1.2.5 鸭黄病毒感染的防治  14-15
  1.3 本研究的目的及意义  15-16
第2章 鸭黄病毒的分离及鉴定  16-26
  2.1 材料与方法  16-20
    2.1.1 材料  16-17
    2.1.2 方法  17-20
  2.2 结果  20-24
    2.2.1 鸭黄病毒的分离  20
    2.2.2 鸭黄病毒的鉴定  20-24
  2.3 讨论  24-25
    2.3.1 病毒的分离  24-25
    2.3.2 病毒的鉴定  25
  2.4 小结  25-26
第3章 鸭黄病毒灭活油乳苗的制备及免疫效力的研究  26-36
  3.1 材料与方法  26-30
    3.1.1 材料  26-27
    3.1.2 方法  27-30
  3.2 结果  30-34
    3.2.1 鸭黄病毒 ELD50值  30
    3.2.2 鸭黄病毒灭活油乳疫苗的检验结果  30
    3.2.3 疫苗的安全性测定结果  30-31
    3.2.4 鸭血清中抗体水平检测结果  31-32
    3.2.5 鸭血清中 T 淋巴细胞数量检测  32-33
    3.2.6 攻毒保护试验结果  33-34
  3.3 讨论  34-35
    3.3.1 疫苗的制备过程  34
    3.3.2 疫苗的检测  34-35
    3.3.3 疫苗的免疫效果分析  35
  3.4 小结  35-36
第4章 鸭黄病毒灭活油乳苗的应用  36-42
  4.1 材料与方法  36-37
    4.1.1 材料  36
    4.1.2 方法  36-37
  4.2 结果  37-40
    4.2.1 疫苗对雏鸭的免疫效果  37-39
    4.2.2 疫苗对蛋鸭的免疫结果  39-40
  4.3 讨论  40-41
  4.4 小结  41-42
第5章 结论  42-43
参考文献  43-46
缩略语词汇表  46-47
致谢  47-48
攻读硕士学位期间的研究成果  48

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家禽 > 鸭
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