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四川、重庆地区鸭源沙门氏菌分离鉴定及耐药性研究
作 者: 程平
导 师: 蒋文灿
学 校: 四川农业大学
专 业: 预防兽医学
关键词: 沙门氏菌 血清型 耐药 基因
分类号: S858.32
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
本文采用常规试验方法对采自四川、重庆地区种鸭场,其中死胚292份,弱雏76份,共计368份疑似被沙门氏菌感染样品的肝脏进行分离,经鉴定共有163份样品呈阳性;用60种沙门氏菌阳性血清进行血清定型,用Kirby-Bauer法检测了163株沙门氏菌对20种常规抗菌药物的耐药性,用PCR法检测了已确定血清型96株沙门氏菌的耐药基因,结果表明:1.163株沙门氏菌中有96株能进行血清定型,分属A群,B群、C群,F群;另有67株属粗糙型菌落不能分型。其中A群有26株(27.1%),B群有2株(2.1%),C群有65株(69.8%),F群有1株(1.0%)2.163株沙门氏菌的药敏试验结果表明,沙门氏菌耐药性十分严重。所有试验菌株都表现出对P-G.OXA耐药;耐药率较严重的有CRL.ERY.CFM.CFX. AMP.NW和TET,分别是42.3%、66.3%、77.9%、85.3%、83.5%,90.8%;耐药率在20%-30%之间的有2种,分别为CFA(23.9%)和MOK(23.9%);在10%-20%之间的有5种抗生素,分别是CFX(14.1%).CFM(12.3%).PIP(11.7%);耐药率低于10%的有KAN(4.3%).CRO(1.8%).CTD(1.8%).CFP(7.4%).3.所有菌株通过对四环素耐药基因tetA.氨基糖苷类耐药基因aada2,β-内酰胺类耐药基因blatem耐药基因的检测。检测结果表明,96株鸭源沙门氏菌中,有64.6%(62株)检测到耐药基因blatem:有82.3%(79株)检测到耐药基因tetA;有51.0%(49株)检测到耐药基因aadA2,3种耐药基因在7个地区都相应被检测出。
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全文目录
中文摘要 4-5 ABSTRACT 5-7 文中常用缩略词 7-12 第一部分 文献综述 12-22 1 沙门氏菌病原学特征 12 2 沙门氏菌检测方法 12-17 2.1 常规检测法 12-13 2.2 分子生物学检测法 13-15 2.2.1 核酸扩增技术检测法 13-15 2.2.2 核酸探针检测技术(Nuclear acid probe) 15 2.3 免疫学技术 15-17 2.3.1 酶标抗体法(ELISA) 15-16 2.3.2 免疫荧光法 16 2.3.3 免疫酶标法 16 2.3.4 免疫学其它检测方法 16-17 2.4 其它检测沙门氏菌的方法 17 3 沙门氏菌的公共卫生学意义 17-18 4 沙门氏菌耐药机制 18-21 4.1 酶对抗菌药物的修饰引起的耐药 18 4.2 膜通透性发生改变引起的耐药 18-19 4.3 靶位基因发生突变引起的耐药 19 4.4 质粒介导引起的耐药性 19-20 4.5 其它机理引起的耐药性 20-21 5 研究目的及意义 21-22 第二部分 试验研究 22-53 第一章 鸭源沙门氏菌分离鉴定及血清定型 22-35 1 试验材料 22-23 1.1 试验样品 22 1.2 参考菌株 22 1.3 试验药品及培养基配制 22-23 1.4 实验仪器 23 1.5 试验动物 23 2 试验方法 23-26 2.1 沙门氏菌分离纯化 23-24 2.2 生化试验 24 2.3 沙门氏菌PCR鉴定 24-25 2.3.1 引物合成 24 2.3.2 模板提取 24 2.3.3 沙门氏菌invA基因PCR扩增 24-25 2.3.4 PCR产物分析 25 2.4 沙门氏菌血清型鉴定 25-26 2.4.1 抗原制备 25 2.4.2 玻片准备 25 2.4.3 菌体抗原(O)鉴定 25 2.4.4 鞭毛抗原(H)鉴定 25-26 2.4.5 荚膜抗原(Vi)测定 26 2.5 动物致病性实验 26 3 结果与讨论 26-32 3.1 沙门氏菌分离鉴定结果 26-29 3.1.1 沙门氏菌阳性检出结果 26 3.1.2 沙门氏菌分离培养 26-27 3.1.3 分离菌株生化试验鉴定结果 27-28 3.1.4 分离株PCR鉴定结果 28-29 3.2 分离株血清定型结果 29-30 3.3 动物致病性试验结果 30-32 4 讨论 32-33 4.1 沙门氏菌分离鉴定及血清定型 32-33 4.2 动物致病性试验 33 5 结论 33-35 第二章 鸭源沙门氏菌药敏试验、多重耐药试验分析 35-46 1 试验材料 35-37 1.1 试验样品 35-37 1.2 试验仪器及设备 37 2 试验方法 37-38 2.1 菌液稀释 37 2.2 药敏试验 37-38 3 试验结果和讨论 38-43 3.1 药敏试验结果 38-43 3.1.1 163株鸭源沙门氏菌药敏试验结果 38-39 3.1.2 不同地区鸭源沙门氏菌耐药情况 39-41 3.1.3 不同地区多重耐药性 41-42 3.1.4 不同地区沙门氏菌多重耐药情况 42-43 4 讨论 43-46 第三章 沙门氏菌耐药基因检测及表型分析 46-53 1 试验材料 46 1.1 试验菌株 46 1.2 试验主要试剂 46 1.3 试验主要仪器 46 2 试验方法 46-48 2.1 沙门氏菌耐药基因引物设计 46-47 2.2 模板提取 47 2.3 沙门氏菌耐药基因PCR扩增 47-48 2.4 PCR产物分析 48 3 沙门氏菌耐药基因检测结果 48-52 3.1 B-内酰胺类耐药基因检测 48 3.2 四环素类耐药基因检测 48-49 3.3 氨基糖苷类耐药基因 49 3.4 鸭源沙门氏菌三种耐药基因检出情况 49-50 3.5 7个地区耐药基因分布概况 50-51 3.6 含耐药基因的菌株数与耐药菌株数的比较 51-52 4 结论 52-53 参考文献 53-62 致谢 62
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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家禽 > 鸭
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