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鸭瘟病毒UL2基因的原核表达及鉴别鸭瘟病毒强弱毒株PCR方法的建立
作 者: 尹雪琴
导 师: 程安春
学 校: 四川农业大学
专 业: 预防兽医学
关键词: 鸭瘟病毒 UL2基因 原核表达 多克隆抗体制备 鉴别诊断 PCR
分类号: S858.32
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 17次
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内容摘要
目前还未见对DPVUL2基因研究的报道,本论文对本实验室注册的DPV-CHv株的UL2基因(登录号为EU885419)进行了生物信息学分析、原核表达、多克隆抗体制备;同时还根据UL2基因特点设计了一种鉴别DPV强弱毒株感染的PCR方法,研究结果如下:1.DPV-UL2基因的生物信息学分析DPV-UL2基因编码尿嘧啶DNA糖基化酶(Uracil-DNA glycosylase, UDG),生物信息学分析方法预测结果表明,UDG分子量为37.2946kDa,由333个氨基酸组成,没有信号肽及跨膜区;含4个保守结构和有18个功能位点,抗原表位较多;UL2基因不含有多个连续的稀有密码子。2.鸭瘟病毒UL2基因克隆、原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备根据DPV UL2基因序列,采用Primer Premier5.0软件设计了一对特异性引物,并将扩增出的UL2全基因克隆入pMD18-T载体中,经BamHI和Hind III双酶切后,克隆入原核表达载体pET-32a(+)中,成功构建了pET32a-UL2重组原核质粒。将此质粒转化表达宿主菌Rosseta,确定了pET32a-UL2重组质粒可在Rosseta中表达,表达的重组蛋白约为58kDa。使用Ni-NTA琼脂糖凝胶纯化重组蛋白,将纯化后的重组蛋白免疫雄性家兔,制备兔抗重组蛋白高免血清,最高效价为1:32。3.一种鉴别鸭瘟病毒强毒与疫苗毒的PCR检测方法对DPV UL2基因的分析发现强弱毒株的UL2基因存在较大差异,强毒株UL2基因片段为1002bp,弱毒株UL2基因片段为474bp。利用这种显著的差异建立了区分强弱毒感染的PCR方法。且此方法特异性及敏感性效果较好,可用于临床DPV强弱毒的鉴别诊断。
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全文目录
中文摘要 3-4 ABSTRACT 4-6 第一部分 文献综述和选题目的及意义 6-9 第一章 文献综述和选题目的及意义 6-9 1. 疱疹病毒尿嘧啶DNA糖基化酶基因及其编码蛋白研究进展 6-8 2. 选题目的和意义 8-9 第二部分 试验研究 9-28 第二章 UL2蛋白的生物信息学分析 9-16 1. 材料 9 2. 试验方法 9-10 3. 试验结果 10-14 4. 讨论 14-16 第三章 鸭瘟病毒UL2基因克隆、原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备 16-22 1. 试验材料 16 2. 试验方法 16-19 3. 试验结果 19-21 4. 讨论 21-22 第四章 一种鉴别鸭瘟病毒强毒与疫苗毒的PCR检测方法 22-28 1. 试验材料 22 2. 试验方法 22-24 3. 试验结果 24-26 4. 讨论 26-28 第三部分 结论 28-29 第四部分 参考文献 29-32 致谢 32-33 作者简介及攻读硕士学位期间发表的学术论文 33
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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家禽 > 鸭
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