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鸭甲肝病毒1型WF1001株的分离鉴定及致病性研究

作 者: 窦鹏斐
导 师: 姜世金
学 校: 山东农业大学
专 业: 兽医
关键词: DHAV-1 毒力测定 荧光定量RT-PCR 病毒载量
分类号: S858.32
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 6次
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内容摘要


鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis)是由鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus, DHV)引起的雏鸭的一种高度致死性传染病,主要感染1~3周龄雏鸭。随着我国水禽业的发展,DHAV发病率和死亡率均呈现上升趋势,已成为危害养鸭业健康发展的主要疾病之一。本研究采用山东潍坊某鸭场分离鉴定的DHAV-1毒株人工感染SPF雏鸭,通过毒力测定、病理剖检、组织切片H.E染色对该毒株的致病性进行了较为系统的研究,阐明了该毒株的致病性。本研究主要包括以下内容:1、1株DHAV-1的分离鉴定及毒力测定本研究通过对山东潍坊地区疑似病鸭病料进行病毒分离鉴定后与GenBank收录的DHAV的全基因组序列进行同源性比较为91.9~94.7%。通过检测鸭胚及雏鸭的半数致死量来测定毒力大小,鸭胚半数致死量为10-5.7/0.2mL。2、DHAV-1在雏鸭体内的动态分布规律研究本研究主要通过动物接种、荧光定量RT-PCR方法来研究病毒在雏鸭体内不同部位的病毒载量,能够为更深一步了解DHAV-1的致病机理提供理论基础。根据实验室已经成功建立的检测DHAV-1的实时荧光定量RT-PCR方法来检测雏鸭体内的病毒含量,用不同剂量对DHAV-1感染后l h、6h、12h、18h、24h、36h、48h、72h以及96h在雏鸭体内各个组织器官中的病毒荷载量进行了动态定量分析。相对于其他被检器官来说肝脏中的病毒含量最高,并且病毒含量的多少与攻毒剂量也有关系,在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、法氏囊、胸腺都能检测到,并且病毒载量与感染时间有关系,在24h~48h病毒含量最高。

全文目录


中文摘要  7-8
Abstract  8-10
1 前言  10-27
  1.1 鸭病毒性肝炎及其病原  10-11
  1.2 DHAV 的分型  11-12
  1.3 DHAV 的致病机理  12-13
  1.4 DHAV 基因组结构与功能  13-16
    1.4.1 DHAV 基因组非编码区  14-15
    1.4.2 DHAV 基因组编码区  15-16
  1.5 鸭甲肝病毒的生物学特性及理化特性  16-17
    1.5.1 形态结构与生物学特性  16-17
    1.5.2 理化特性  17
  1.6 实验室宿主系统  17-18
    1.6.1 胚胎  17
    1.6.2 细胞培养物  17-18
  1.7 鸭甲肝病毒的检测技术研究进展  18-23
    1.7.1 病原学检测  18-19
    1.7.2 血清学检测  19-21
    1.7.3 分子生物学诊断方法  21-23
  1.8 实时荧光定量 RT-PCR 检测 DHAV 的研究进展  23
  1.9 DHAV 的防控及治疗  23-25
    1.9.1 管理措施  23-24
    1.9.2 免疫接种  24-25
    1.9.3 治疗  25
  1.10 本研究的目的和意义  25-27
2 材料与方法  27-37
  2.1 材料  27-28
    2.1.1 毒株来源及菌株  27
    2.1.2 实验动物  27
    2.1.3 主要仪器  27
    2.1.4 酶和相关试剂  27
    2.1.5 实验室所用溶液  27-28
    2.1.6 引物设计与合成  28
  2.2 方法  28-37
    2.2.1 病毒的分离与鉴定  28-33
    2.2.2 病毒的毒力测定  33-34
    2.2.3 应用实时荧光定量 RT-PCR 方法检测 DHAV-1 在雏鸭体内的动态定量分布  34-37
3 结果与分析  37-49
  3.1 WF1001 株 DHAV-1 的分离与鉴定  37-38
    3.1.1 接种鸭胚结果  37
    3.1.2 RT-PCR 鉴定结果  37-38
  3.2 WF1001 株 DHAV-1 毒力检测的结果  38
  3.3 WF1001 株 DHAV-1 在雏鸭体内动态分布规律研究  38-49
    3.3.1 WF1001 株 DHAV-1 人工感染雏鸭的临床表现及剖检变化  38-40
    3.3.2 DHAV-1 在雏鸭体内的动态分布规律  40-49
4 讨论与分析  49-50
5 结论  50-51
参考文献  51-56
致谢  56-57
攻读硕士学位期间发表论文情况  57

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家禽 >
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