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家兔无乳链球菌的分离鉴定及其感染的动态病理学与病原分布研究
作 者: 任思宇
导 师: 耿毅
学 校: 四川农业大学
专 业: 基础兽医学
关键词: 无乳链球菌 家兔 病理形态学 侵染规律 间接原位PCR
分类号: S858.291
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
2011年7月四川绵阳某家兔养殖场爆发了以四肢麻痹、划游和呼吸障碍为特征的疾病,死亡率达42%;从患病家兔肝、肺、脑和心血中分离到一株链状革兰氏阳性球菌(P110323),以浓度为1×106CFU/mL的P110323菌株培养液灌胃感染健康家兔,家兔出现站立不稳、四肢划动、惊厥和呼吸障碍等症状,并逐渐死亡;解剖可见肺淤血、出血;肝、脾和肾肿大,坏死;大脑肿胀,脑膜充血,脑回肿胀扁平,脑沟变浅。P110323在BHI平板上形成湿润、边缘整齐的灰白色菌落,在5%的脱纤维羊血平板上形成透明的p溶血环,V-P试验、水解精氨酸与马脲酸等为阳性;水解七叶苷和利用甘露醇、山梨醇产酸为阴性。药物敏感性实验结果显示氨苄西林、庆大霉素、氟哌酸、奥复星、复达欣和氟苯尼考对P110323有效,四环素、强力霉素的抑制作用为中介;青霉素,链霉素,阿莫西林、丁胺卡娜及妥布霉素对其无效。16S rDNA系统发育分析显示分离菌与Streptococcus difficilis和Streptococcus agalactiae聚在一簇;gyrB基因系统发育分析表明分离菌属于无乳链球菌(S. agalactiae).结合细菌形态特点和生理生化特性,鉴定该P110323为无乳链球菌(S. agalactiae),多重PCR方法确定该菌荚膜多糖类型为la型。采用灌胃接种的感染方式建立S. agalactiae人工感染家兔的病理模型,观察和记录家兔感染后的临床症状,并在接种后的0h,6h,12h,18h,24h,48h,72h,96h......10d时间点,随机抽取试验组和对照组家兔各2只,腹腔注射过量的戊巴比妥让其死亡,解剖后取脑、心、肝、脾、肾、肺等重要的组织器官进行组织病理学、超微病理学研究,同时建立基于无乳链球菌cfb基因的间接原位PCR检测方法研究无乳链球菌感染家兔后的侵染规律。结果表明S. agalactiae主要引起胃、肺、肝、脾、肾、小脑等组织的损伤,并导致家兔体内发生弥散性血管内凝血(Disseminated intravascular coagulation, DIC),引起死亡。接种6h后,在胃组织中检测出S. agalactiae,引起胃组织充血,黏膜上皮坏死、脱落;12h在脾和肺中检测到S. agalactiae,脾可见巨噬细胞增多和淋巴细胞减少,随着病情发展,脾出现弥漫性坏死,细胞结构模糊不清;肺在感染初期表现为充血、出血,大量巨噬细胞出现在肺泡腔内,后期在肺泡隔的小血管中形成微血栓;24h在肝和肾中出现阳性信号,S. agalactiae主要引起肝淤血、肝细胞颗粒变性及溶解坏死,并逐渐在门管区血管中形成血栓;肾主要表现为肾小管上皮细胞坏死脱落,肾小球毛细血管中形成透明血栓;2d后在心肌和小脑中检测到阳性信号,心肌肌纤维胞浆浓缩,逐步演变为肌纤维的断裂坏死;小脑中S. agalactiae主要集中在分子层,引起神经细胞的溶解坏死,神经元髓鞘结构增厚。
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全文目录
摘要 5-7 ABSTRACT 7-11 第一章 家兔养殖与病害 11-15 1 家兔生物学特性 11-12 2 家兔养殖概况 12 3 家兔主要病害 12-15 3.1 病毒性疾病 12-13 3.2 细菌性疾病 13 3.3 寄生虫性疾病 13-14 3.4 真菌性疾病 14-15 第二章 无乳链球菌的研究进展 15-23 1 无乳链球菌的分类及生物学特性 15 2 无乳链球菌的感染及病症 15-17 2.1 鱼类无乳链球菌感染 15-16 2.2 奶牛无乳链球菌感染 16 2.3 人类无乳链球菌感染 16-17 3 无乳链球菌致病机理及毒力因子 17-20 3.1 荚膜多糖 18 3.2 表面蛋白 18-19 3.3 β-溶血素 19 3.4 肽聚糖 19 3.5 脂磷壁酸 19-20 4 无乳链球菌的防治 20-21 4.1 改善养殖环境 20 4.2 化学药物治疗 20-21 4.3 免疫防治 21 5 无乳链球菌的监测和定位研究现状 21-23 第三章 家兔无乳链球菌的分离鉴定 23-31 1 材料与方法 23-25 1.1 材料 23 1.2 方法 23-25 2 结果 25-28 2.1 病原菌分离与回归感染试验 25 2.2 生化特性 25-26 2.3 药物敏感性实验 26-27 2.4 荚膜多糖分子血清型 27-28 3 讨论 28-31 3.1 无乳链球菌鉴定及感染现状 28-29 3.2 无乳链球菌的药物敏感特性 29-30 3.3 无乳链球菌血清型分型 30-31 第四章 无乳链球菌感染家兔的动态病理学及病原分布研究 31-57 1 材料 31-32 1.1 试验动物 31 1.2 主要试剂及配置方法 31-32 1.3 主要仪器 32 2 试验方法 32-36 2.1 人工感染 32-33 2.2 临床症状及病理解剖变化 33 2.3 组织病理学观察 33 2.4 细胞病理学观察 33-34 2.5 间接原位PCR检测病原分布 34-36 3 结果 36-54 3.1 主要临床与解剖症状 36-37 3.2 动态病理学观察 37-47 3.3 超微病理学变化 47-49 3.4 间接原位PCR检测家兔无乳链球菌的分布 49-54 4 讨论 54-57 4.1 间接原位PCR技术 54-55 4.2 无乳链球菌感染家兔的致病机理 55-56 4.3 无乳链球菌感染家兔的侵染过程 56-57 结论 57-58 参考文献 58-65 致谢 65-66 发表文章情况 66
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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家畜 > 兔
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