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高氟对雏鸡盲肠扁桃体影响的机理研究

作 者: 刘娟
导 师: 崔恒敏
学 校: 四川农业大学
专 业: 基础兽医学
关键词: 高氟 雏鸡 盲肠扁桃体 流式细胞术 细胞凋亡
分类号: S858.31
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要


本试验通过对肉鸡饲喂玉米-豆粕型基础饲料和添加不同梯度的含氟化钠饲料,来探讨日粮中过量氟对肉鸡盲肠扁桃体抗氧化功能、病理形态学变化、T淋巴细胞亚群的变化以及免疫活性物质等的变化。实验选用280只1日龄艾维茵肉鸡,随机分为4组,分别饲喂对照日粮(F22.6mg/kg)和高氟日粮(F400mg/kg,高氟Ⅰ组;F800mg/kg,高氟Ⅱ组;F1200mg/kg,高氟Ⅲ组),随意饮水,自由采食42天,并在实验第14、28、42采取盲肠扁桃体进行实验。结果如下:①与对照组相比,高氟Ⅱ、Ⅲ组雏鸡盲肠扁桃体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性显著降低(P<0.05或P<0.01),谷胱甘肽(GSH)含量和抑制羟自由基能力显著降低(P<0.01),丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.01),高氟Ⅰ组变化不显著。②病理形态学观察,高氟组盲肠扁桃体淋巴细胞减少,淋巴小结数量减少。流式细胞仪测定,高氟Ⅱ和Ⅲ组淋巴细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01),免疫组化染色可见Bcl-2蛋白含量显著降低(P<0.01), Bax和Caspase-3蛋白含量显著升高(P<0.01)。③用流式细胞术(FCM)对盲肠扁桃体T淋巴细胞亚群检测发现,高氟Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组雏鸡盲肠扁桃体CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞均低于对照组且呈现显著的剂量效应。④酶联免疫吸附试验检测发现,高氟Ⅱ和Ⅲ组雏鸡盲肠扁桃体细胞悬液中IL-2、IL-4、IL-6、INF-γ和TNF-α含量低于对照组(P<0.05或P<0.01)。⑤免疫组化染色发现,高氟Ⅱ和Ⅲ组雏鸡盲肠扁桃体分泌型IgA(SIgA)数量显著低于对照组(P<0.01),ELISA检测发现,高氟Ⅱ和Ⅲ组雏鸡盲肠扁桃体中IgA、IgG和IgM含量低于对照组(P<0.05或P<0.01),高氟Ⅰ组变化不显著。研究结果表明:日粮氟含量为800mg/kg及以上时,①盲肠扁桃体抗氧化酶(SOD、GSH-Px和CAT)活性降低,GSH含量和抑制羟自由基能力降低,MDA含量升高,导致盲肠扁桃体发生氧化损伤。②盲肠扁桃体T淋巴细胞凋亡率和凋亡蛋白的显著变化是导致盲肠扁桃体生长发育受阻的病理基础。③盲肠扁桃体T淋巴细胞亚群比例发生变化,CD4+和CD8+T细胞比例显著减少,影响了成熟T淋巴细胞生物学和生理学功能,从而产生抑制盲肠扁桃体细胞免疫功能。④细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、INF-γ和TNF-α)含量降低是免疫功能受阻的表现。⑤盲肠扁桃体SIgA数量减少,IgA、IgG和IgM含量降低,提示B淋巴细胞的功能受损,影响了肠道的粘膜免疫功能。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-12
1 前言  12-20
  1.1 选题背景  12
  1.2 文献综述  12-20
    1.2.1 氟的生理作用  12
    1.2.2 氟的代谢  12-13
    1.2.3 氟中毒对骨骼的影响  13
    1.2.4 氟中毒对消化系统的影响  13-14
    1.2.5 氟中毒对泌尿系统的影响  14-15
    1.2.6 氟中毒对生殖系统的影响  15
    1.2.7 氟中毒对神经系统的影响  15-16
    1.2.8 氟中毒对循环系统的影响  16
    1.2.9 氟中毒对抗氧化功能的影响  16-17
    1.2.10 氟中毒对免疫系统的影响  17-19
    1.2.11 氟中毒对盲肠扁桃体的影响  19-20
2 试验目的及意义  20-21
3 材料与方法  21-24
  3.1 试验材料  21
    3.1.1 试验动物  21
    3.1.2 试验日粮  21
    3.1.3 主要试剂和仪器  21
  3.2 试验方法  21-24
    3.2.1 动物分组及饲养管理  21
    3.2.2 临床观察  21-22
    3.2.3 病理学观察  22-23
    3.2.4 抗氧化指标检测  23
    3.2.5 盲肠扁桃体凋亡检测  23-24
    3.2.6 盲肠扁桃体T-cell亚群的测定  24
    3.2.7 盲肠扁桃体中细胞因子的测定  24
    3.2.8 盲肠扁桃体中免疫球蛋白测定  24
  3.3 数据处理  24
4 结果  24-54
  4.1 临床观察  24-27
  4.2 病理学观察  27-29
    4.2.1 剖检变化  27
    4.2.2 组织学变化  27-29
  4.3 盲肠扁桃体抗氧化指标的变化  29-35
    4.3.1 盲肠扁桃体SOD活性变化  29-30
    4.3.2 盲肠扁桃体GSH-Px活性变化  30-31
    4.3.3 盲肠扁桃体CAT活性变化  31-32
    4.3.4 盲肠扁桃体GSH含量变化  32-33
    4.3.5 盲肠扁桃体抑制羟自由基能力的变化  33-34
    4.3.6 盲肠扁桃体MDA含量变化  34-35
  4.4 盲肠扁桃体淋巴细胞凋亡检测  35-42
    4.4.1 盲肠扁桃体淋巴细胞凋亡百分率变化  35-37
    4.4.2 盲肠扁桃体Bcl-2凋亡蛋白含量变化  37-39
    4.4.3 盲肠扁桃体Bax凋亡蛋白含量变化  39-40
    4.4.4 盲肠扁桃体Caspase-3凋亡蛋白含量变化  40-42
  4.5 盲肠扁桃体T淋巴细胞亚群检测  42-44
  4.6 盲肠扁桃体细胞因子含量变化  44-49
    4.6.1 盲肠扁桃体IL-2含量变化  44-45
    4.6.2 盲肠扁桃体IL-4含量变化  45-46
    4.6.3 盲肠扁桃体IL-6含量变化  46-47
    4.6.4 盲肠扁桃体INF-γ含量变化  47-48
    4.6.5 盲肠扁桃体TNF-α含量变化  48-49
  4.7 盲肠扁桃体免疫球蛋白检测  49-54
    4.7.1 盲肠扁桃体SIgA含量变化  49-51
    4.7.2 盲肠扁桃体IgA含量变化  51-52
    4.7.3 盲肠扁桃体IgM含量变化  52-53
    4.7.4 盲肠扁桃体IgG含量变化  53-54
5 讨论  54-60
  5.1 高氟雏鸡生长发育的影响  54-55
  5.2 高氟对雏鸡盲肠扁桃体抗氧化指标的影响  55-56
  5.3 高氟对雏鸡盲肠扁桃体淋巴细胞凋亡的影响  56-57
  5.4 高氟对雏鸡盲肠扁桃体T淋巴细胞亚群的影响  57
  5.5 氟对雏鸡盲肠扁桃体细胞因子的影响  57-59
  5.6 高氟对雏鸡盲肠扁桃体免疫球蛋白的影响  59-60
6 结论  60-61
参考文献  61-72
致谢  72-73
攻读学位期间第一作者身份发表论文  73

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