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日粮中添加亚硒酸钠对黄曲霉素B1中毒雏鸡免疫器官影响的研究

作　者: 陈科杰
导　师: 彭西
学　校: 四川农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 亚硒酸钠 AFB1 雏鸡 免疫器官 流式细胞术 细胞凋亡 Bax Bcl-2 Caspase-3 免疫球蛋白
分类号: S858.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


本研究选用1日龄艾维茵肉鸡健雏300只,随机分为5组,分别饲喂对照日粮(经检测硒含量为0.404mg/kg)、AFB1组日粮(0.3mg/kg AFB1)及硒添加日粮(分别在AFB1组日粮中以亚硒酸钠为硒源添加0.2、0.4(?)0.6mg/kg硒构成硒添加Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组日粮)21天,以组织病理学、生物化学法、流式细胞术及ELISA法观察研究亚硒酸钠对AFB1中毒雏鸡免疫器官的作用。结果如下：胸腺：试验期间,AFB1组胸腺脏器指数均低于对照组,主要的组织学变化为髓质区淤血及皮质区有多量的核碎片。流式细胞术及TUNEL检测结果显示,AFB1组胸腺细胞的凋亡率均较对照组升高,胸腺Bax及Caspase-3表达量增加,而Bcl-2表达量减少。CD4+CD8和CD4-CD8+T淋巴细胞表示胸腺中成熟淋巴细胞,AFB1组成熟淋巴细胞比例在整个试验期间较对照组降低。AFB1组外周血CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞比例及血清中IL-2和IFN-y含量均较对照组降低。与AFB1组相比,日粮中添加亚硒酸钠可提高胸腺的脏器指数、减轻胸腺的组织学损伤、减少胸腺细胞凋亡率、提高胸腺成熟淋巴细胞及外周血CD3+、CD3+CD4+(?)PCD3+CD8+T淋巴细胞比例,以及提高血清IL-2和IFN-y含量。脾脏：21日龄时,AFB1组脾脏脏器指数较对照组降低,主要的组织学变化为红髓区充血和动脉周围淋巴鞘出现空洞。生物化学法检测结果显示,AFB1组脾脏谷胱甘肽过氧化物酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽还原酶、过氧化氢酶活性及谷胱甘肽含量均降低,而丙二醛含量增加。流式细胞术及TUNEL检测结果显示,AFB1组脾脏细胞凋亡率较对照组升高。AFB1组脾脏中CD3+、CD3+CD4+(?)CD3+CD8+T淋巴细胞比例在整个试验期间较对照组降低。与AFB1组相比,日粮中添加亚硒酸钠可提高脾脏的脏器指数、减轻脾脏的组织学损伤、减少氧化应激和脾脏的过度凋亡,并提高脾脏的CD3+、CD3+CD4+(?)PCD3+CD8+T淋巴细胞比例。法氏囊：AFB1组法氏囊脏器指数较对照组降低,组织学变化主要表现为淋巴滤泡中的空洞和核碎片增加。流式细胞术(?)PTUNEL检测结果显示,AFB1组法氏囊细胞凋亡率较对照组升高。免疫组化法检测表明,虽然法氏囊Bax和Bcl-2表达量过低而无统计学意义,但Caspase-3表达量较对照组增加,与凋亡率升高的情况一致。ELISA法检测结果显示,AFB1组血清IgA、IgG和IgM含量均低于对照组。与AFB1组比较,日粮中添加亚硒酸钠可缓解法氏囊的发育阻滞、减轻组织学损伤和过度凋亡,并提高血清免疫球蛋白含量。研究结果表明：含0.3mg/kgAFB1日粮中添加亚硒酸钠后,可减轻胸腺、脾脏和法氏囊的病理损伤,减少细胞凋亡,升高胸腺、脾脏和外周血成熟T淋巴细胞数量,并通过升高血清中IL-2、IFN-γ、IgA、IgG和IgM含量减轻AFB1导致的细胞和体液免疫抑制,其保护机理与硒的抗氧化调节和凋亡调控有关。本试验中,0.804mg/kg日粮硒水平对0.3mg/kgAFB1的拮抗保护作用最佳。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-11
1 前言  11-24
  1.1 黄曲霉素B_1对动物机体的危害  11-19
  1.2 硒对动物机体的保护作用  19-24
2 立体依据及研究目的  24-26
  2.1 立体依据  24-25
  2.2 研究目的  25
  2.3 研究内容及技术路线图  25-26
3 材料和方法  26-31
  3.1 试验材料  26-28
    3.1.1 试验动物  26-27
    3.1.2 试验日粮  27-28
    3.1.3 主要试剂和仪器  28
  3.2 试验方法  28-31
    3.2.1 试验一  28-29
    3.2.2 试验二  29-31
      3.2.2.1 动物分组及饲养管理  29
      3.2.2.2 临床观察  29
      3.2.2.3 免疫器官脏器指数  29
      3.2.2.4 组织病理学观察  29
      3.2.2.5 脾脏抗氧化能力的检测  29
      3.2.2.6 免疫器官细胞凋亡检测  29-31
      3.2.2.7 T淋巴细胞亚群检测  31
      3.2.2.8 血清IL-2和IFN-γ含量检测  31
      3.2.2.9 血清免疫球蛋白含量检测  31
      3.2.2.10 数据处理  31
4 试验结果  31-51
  4.1 试验一  31-32
  4.2 试验二  32-51
    4.2.1 临床观察  32-33
    4.2.2 脏器指数  33-35
      4.2.2.1 胸腺  33
      4.2.2.2 脾脏  33
      4.2.2.3 法氏囊  33-35
    4.2.3 组织学变化  35-37
      4.2.3.1 胸腺  35-36
      4.2.3.2 脾脏  36
      4.2.3.3 法氏囊  36-37
    4.2.4 脾脏抗氧化指标  37-40
      4.2.4.1 GSH含量  37
      4.2.4.2 MDA含量  37-38
      4.2.4.3 GSH-Px活性  38
      4.2.4.4 SOD活性  38
      4.2.4.5 GR活性  38
      4.2.4.6 CAT活性  38-40
    4.2.5 细胞凋亡  40-45
      4.2.5.1 流式细胞术检测细胞凋亡  40-41
        4.2.5.1.1 胸腺  40
        4.2.5.1.2 脾脏  40
        4.2.5.1.3 法氏囊  40-41
      4.2.5.2 TUNEL法检测细胞凋亡  41-43
        4.2.5.2.1 胸腺  41-42
        4.2.5.2.2 脾脏  42
        4.2.5.2.3 法氏囊  42-43
      4.2.5.3 凋亡蛋白  43-45
        4.2.5.3.1 胸腺  43-44
        4.2.5.3.2 脾脏  44-45
        4.2.5.3.3 法氏囊  45
    4.2.6 T淋巴细胞亚群  45-49
      4.2.6.1 胸腺  45-47
      4.2.6.2 脾脏  47-48
      4.2.6.3 外周血  48-49
    4.2.7 血清IL-2和IFN-γ含量  49-50
      4.2.7.1 血清IL-2含量  49
      4.2.7.2 血清IFN-γ含量  49-50
    4.2.8 血清免疫球蛋白含量  50-51
      4.2.8.1 血清IgA含量  50
      4.2.8.2 血清IgG含量  50
      4.2.8.3 血清IgM含量  50-51
5 讨论  51-58
  5.1 AFB_1中毒动物模型的复制  51-52
  5.2 临床症状观察  52
  5.3 AFB_1及添加亚硒酸钠后对胸腺的影响  52-55
  5.4 AFB_1及添加亚硒酸钠后对脾脏的影响  55-56
  5.5 AFB_1及添加亚硒酸钠后对法氏囊的影响  56-58
6 结论与创新点  58-59
参考文献  59-75
版图及说明  75-82
致谢  82-83
攻读学位期间第一作者身份发表论文  83

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家禽 > 鸡
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