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绿竹B类基因克隆与功能初步分析
作 者: 朱龙飞
导 师: 林新春
学 校: 浙江农林大学
专 业: 森林培育
关键词: 绿竹 BoAP3 MADS-box 酵母双杂交
分类号: S795
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 18次
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内容摘要
MADS-box基因家族在决定花分生组织特性和花器官发育过程中起着重要的作用。AP3基因作为MADS-box基因家族的一员,调控花瓣和雄蕊的发育。本文以绿竹(Bambusa oldhamii)开花试管苗花芽为植物材料,采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE)技术,获得了1条AP3-like基因,命名为BoAP3。通过荧光定量PCR分析其在花芽和叶芽中的相对表达,并构建植物表达载体。利用前期cDNA文库筛选得到的BoPI基因构建不同长度的pGBKT7-BoPI和pGADT7-BoAP3载体,研究BoAP3和BoPI蛋白的相互作用,主要研究结果如下:(1)获得了BoAP3基因的cDNA序列998bp,包括654bp的完整ORF编码区,编码218个氨基酸。对该基因编码的蛋白质进行结构预测发现该蛋白具有典型植物MADS-box转录因子的结构域,包括MADS区、I区、K区、C区,属于MADS-box基因;通过生物信息学分析推测其为AP3基因的同源基因,可能具有B类基因的功能;成功构建了BoAP3基因植物表达载体。(2)实时定量PCR结果表明:BoAP3在花芽中表达量明显高于营养芽,是营养芽的8.1倍,表明该基因参与了绿竹花器官的发育。(3)对pGBKT7和pGADT7重组质粒进行自激活检测,发现没有激活报告基因,无自激活作用发生;通过SD/-Leu-Trp-His-Ade培养基筛选得到pGBKT7-BoPI和pGADT7-BoAP3的阳性克隆,然后用X-Gal显色反应鉴定转化到酵母中的重组质粒的相互作用,发现缺失MADS结构域时,BoAP3蛋白和BoPI蛋白不具有相互作用,缺失C区时,BoAP3蛋白和BoPI蛋白仍具有相互作用,表明MADS结构域对于BoAP3蛋白和BoPI蛋白的相互作用具有重要的作用。
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全文目录
摘要 4-5 ABSTRACT 5-7 1 文献综述 7-15 1.1 花的发育与 MADS-box 基因家族 7-8 1.2 花器官发育 ABC 模型及发展 8-11 1.3 ABCDE 功能基因在竹类植物中的研究进展 11-12 1.4 酵母双杂交 12-13 1.5 本课题研究目的与意义 13-14 1.6 课题来源与经费支持 14 1.7 技术路线 14-15 2 材料与方法 15-26 2.1 材料 15-16 2.2 实验方法和步骤 16-26 3 结果与分析 26-35 3.1 绿竹花芽和叶芽总 RNA 提取 26-27 3.2 BoAP3 全长 cDNA 序列的获得 27 3.3 BoAP3 序列生物信息学分析 27-30 3.4 BoAP3 定量表达分析 30-32 3.5 酵母双杂交载体的构建 32-33 3.6 酵母菌株的表型鉴定 33-34 3.7 酵母重组诱饵质粒的自激活检测 34 3.8 BoAP3 蛋白和 BoPI 蛋白的相互作用检测 34-35 4 结论与讨论 35-38 4.1 结论 35-36 4.2 讨论 36-38 参考文献 38-42 个人简介 42 在校期间发表论文情况 42-43 致谢 43
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中图分类: > 农业科学 > 林业 > 森林树种 > 竹
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