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秋水仙素诱导鹤顶兰染色体加倍的技术研究
作 者: 李豆豆
导 师: 唐燕琼
学 校: 海南大学
专 业: 林木遗传育种
关键词: 鹤顶兰 秋水仙素 染色体加倍 倍性鉴定 嵌合体分离
分类号: S682.31
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
鹤顶兰(Phaius tankervilleae)为兰科鹤顶兰属植物,多年生草本,叶长椭圆状披针形,花形优美,色泽鲜艳,是优良的野生热带兰之一。鹤顶兰花朵下垂和属间杂交不易等缺点制约着鹤顶兰的进一步推广。倍性育种是种质资源创新的重要途径之一,将鹤顶兰染色体进行加倍有望克服上述缺点。本研究以鹤顶兰为材料,利用化学诱变与组织培养相结合的技术,研究了秋水仙素诱导鹤顶兰染色体加倍的技术体系,并探讨了嵌合体的分离方法。主要结果如下:1.建立了鹤顶兰的一次成苗离体再生体系。以无菌苗的假鳞茎与茎尖为外植体,诱导类原球茎的最适培养基为花宝一号+2.0mg/LBA+0.2mg/LNAA+椰子水100mL/L+活性炭2g/L+卡拉胶8g/L+蔗糖20g/L,诱导后无需转接于生根培养基中,再生植株生根率达100%,移栽成活率可达98.3%。一次成苗离体再生体系有效的减少了组织培养中多次转接造成的污染,简化了鹤顶兰生产的程序,节约成本,可缩短生产的周期。2.构建了秋水仙素诱导鹤顶兰多倍体的离体诱导体系。分别采用田间诱导、离体诱导(混培法与浸泡法)进行多倍体诱导,以浸泡法效果最好。用浸泡法处理原球茎,当秋水仙素浓度为0.02%,处理时间6d时,变异率可达22.5%,获得纯合四倍体植株3株,嵌合体107株,丰富了鹤顶兰的种质资源,为兰科植物多倍体诱导提供参考。纯合四倍体小苗表现出植株粗壮、叶片肥厚、生长缓慢的特性。3.构建了适合鹤顶兰嵌合体分离纯化的方法。将鹤顶兰嵌合体植株切除根部后接种于一次成苗的半固体培养基中进行嵌合体分离,诱导出类原球茎并发育成苗,分离出2株纯合四倍体。嵌合体的成功分离提高了多倍体诱导的效率。
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全文目录
摘要 4-5 Abstract 5-8 1 前言 8-17 1.1 鹤顶兰简介 8 1.2 鹤顶兰研究进展 8-10 1.2.1 鹤顶兰的形态特征与生长习性 8-9 1.2.2 鹤顶兰的应用 9 1.2.3 鹤顶兰栽培及繁殖 9-10 1.2.4 杂交育种 10 1.2.5 分子生物学研究 10 1.3 植物多倍体育种研究 10-14 1.3.1 植物多倍体概述 11 1.3.2 植物多倍体的物理诱导 11 1.3.3 植物多倍体的化学诱导 11-12 1.3.4 植物多倍体的鉴定方法 12-13 1.3.5 嵌合体的分离 13-14 1.4 兰花多倍体诱导的研究 14 1.5 本研究的意义和目的 14-16 1.6 技术路线 16-17 2 材料与方法 17-20 2.1 试验材料 17 2.2 方法 17-20 2.2.1 鹤顶兰离体快繁体系的建立 17 2.2.2 多倍体的离体诱导方法 17-18 2.2.3 多倍体的田间诱导方法 18 2.2.4 多倍体鉴定方法 18-19 2.2.5 嵌合体的分离 19 2.2.6 统计分析方法 19-20 3 结果分析 20-31 3.1 鹤顶兰离体快繁体系的建立 20-21 3.1.1 鹤顶兰的无菌播种 20 3.1.2 鹤顶兰PLB的离体诱导 20-21 3.1.3 炼苗移栽 21 3.2 鹤顶兰多倍体的诱导 21-27 3.2.1 田间诱导 21 3.2.2 离体诱导 21-27 3.3 多倍体的鉴定 27-29 3.4 嵌合体的分离 29-31 3.4.1 嵌合体的培养与分离 29 3.4.2 变异材料的鉴定 29-31 4 讨论 31-33 4.1 外植体的选择 31 4.2 一次成苗培养基 31 4.3 鹤顶兰多倍体的离体诱导 31-32 4.4 鹤顶兰多倍体的田间诱导 32 4.5 鹤顶兰变异材料的鉴定 32 4.6 离体条件下的嵌合体分离 32-33 4.7 后续研究 33 5 结论 33-34 参考文献 34-41 致谢 41
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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 观赏园艺(花卉和观赏树木) > 多年生花卉类 > 其他花卉类 > 兰科植物
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