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茶叶中抑制黄曲霉毒素产生的组分及相关特性研究

作　者: 吴清华
导　师: 丁武
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 食品工程
关键词: 茶叶茶多酚黄曲霉黄曲霉毒素特性研究
分类号: TS272.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

黄曲霉毒素（Aflatoxin，AF）是一类毒性很强的真菌次生代谢产物。一旦黄曲霉污染农作物，将会给世界各国的经济带来巨大的损失，并且严重威胁着人蓄的健康。黄曲霉毒素通过加工和贮藏等过程污染茶叶，这些污染引发了对茶尤其是发酵茶安全性的担忧，严重威胁着发酵茶的安全消费和国际贸易。本试验以黄曲霉菌（Aspergillus flavus CGMCC3.2890）和黄曲霉毒素B1（AFB1）为污染因子，以信阳毛尖为污染受体对象；将从发酵过程控制、以及功能拮抗组分鉴定等方面入手，研究茶叶中的生物活性成分对黄曲霉产毒和生长的影响。研究结果如下：1.以信阳毛尖为发酵茶原料，接入黄曲霉菌（CGMCC3.2890）发酵，分别在发酵0，5，10，15，20，25，35d后接入高产毒的黄曲霉，发酵周期为40d，用UPLC-MS检测黄曲霉毒素产毒情况，并测定不同时期茶多酚组分变化，结果表明在自然发酵过程中发酵0，5，20d后接入黄曲霉的处理产黄曲霉毒素B1含量较高，分别为17.52，15.79，11.16μg/kg。在人工发酵过程中，黄曲霉毒素的含量也呈增加的趋势。2.分析了生普、熟普、红茶、绿茶和花茶的茶样水提物对黄曲霉产毒和生长的影响，结果表明，茶叶水提物均对黄曲霉的生长没有明显的抑制作用，有的还促进了黄曲霉的生长；但其均对黄曲霉产毒有不同程度的抑制作用，其中熟普对黄曲霉产毒的抑制作用相对较强，特别是熟普茶样2的水提物浓度在100μg/mL时即能抑制黄曲霉的产毒。3.以11种茶多酚单体的标准品为研究对象，分别检测其对黄曲霉生长及产毒的影响，试验表明没食子酸，表儿茶素，表没食子儿茶素，香豆素对黄曲霉产毒抑制较强，槲皮素的抑制强度最强，浓度为100μg/mL时，抑制效果显著；槲皮素浓度达到800μg/mL抑制黄曲霉的生长，其他单体均不抑制黄曲霉的生长。4.通过RT-PCR分析发现，用抑毒活性最强茶叶水提物和茶多酚可以下调黄曲霉毒素的产毒基因aflR和aflS的表达。由此表明茶叶中的生物活性成分可能是通过aflR调控黄曲霉毒素的合成。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-11
第一章文献综述  11-24
  1.1 黄曲霉  11
  1.2 黄曲霉毒素  11-19
    1.2.1 黄曲霉毒素的产生  11
    1.2.2 黄曲霉毒素及危害  11-12
    1.2.3 黄曲霉毒素的合成途径  12-13
    1.2.4 黄曲霉毒素合成的相关基因表达与调控  13-15
    1.2.5 黄曲霉毒素的检测方法  15-17
    1.2.6 黄曲霉毒素的限量标准  17-18
    1.2.7 黄曲霉毒素致肝癌机制  18-19
  1.3 茶叶  19-20
    1.3.1 茶叶的种类  19
    1.3.2 茶多酚  19-20
    1.3.3 氨基酸  20
    1.3.4 茶叶安全  20
  1.4 黄曲霉毒素的控制  20-22
    1.4.1 黄曲霉毒素的预防  20-21
    1.4.2 降低 AFBl 的毒性  21-22
  1.5 研究目的与意义  22-23
  1.6 研究内容  23-24
第二章受黄曲霉污染的茶叶发酵  24-31
  2.1 试验材料  24
    2.1.1 培养基  24
    2.1.2 供试菌株  24
    2.1.3 试剂  24
    2.1.4 仪器与设备  24
  2.2 试验方法  24-26
    2.2.1  24-25
    2.2.2 不同发酵时期茶叶对黄曲霉毒素污染的敏感性测定  25-26
  2.3 结果与分析  26-29
    2.3.1 茶叶发酵试验  26-27
    2.3.2 黄曲霉毒素的含量测定  27-29
  2.4 小结  29-31
第三章茶叶水提物对黄曲霉的影响  31-41
  3.1 试验材料  31
    3.1.1 培养基  31
    3.1.2 供试菌株  31
    3.1.3 材料  31
    3.1.4 试剂  31
    3.1.5 仪器与设备  31
  3.2 试验方法  31-34
    3.2.1 茶叶水提物对黄曲霉生长和产毒影响  31-32
    3.2.2 普洱茶水提取物黄曲霉菌基因的转录分析  32-34
  3.3 结果与分析  34-40
    3.3.1 不同样品茶提取物对黄曲霉生长的影响  34-36
    3.3.2 不同样品茶提取物对黄曲霉产毒的影响  36-39
    3.3.3 抑毒活性强的水提物对产毒基因在转录水平的调控作用  39-40
  3.4 小结  40-41
第四章茶叶中抑毒组分的筛选  41-57
  4.1 试验材料  41
    4.1.1 培养基  41
    4.1.2 供试菌株  41
    4.1.3 试剂  41
    4.1.4 仪器与设备  41
  4.2 试验方法  41-45
    4.2.1 茶多酚总量的测定  41-42
    4.2.2 茶多酚组分检测  42-43
    4.2.3 茶多酚单体对黄曲霉产毒的影响  43
    4.2.4 茶多酚单体对黄曲霉生长的影响  43
    4.2.5 黄曲霉菌基因的转录分析  43-45
  4.3 结果与分析  45-56
    4.3.1 标准曲线  45
    4.3.2 茶多酚总量测定结果  45-46
    4.3.3 茶多酚组分在发酵过程中的变化  46-53
    4.3.4 茶多酚单体对黄曲霉产毒的影响  53-55
    4.3.5 茶多酚单体对黄曲霉生长的影响  55
    4.3.6 抑制活性强的单体对产毒基因转录的调控作用  55-56
  4.4 小结  56-57
第五章结论与展望  57-59
  5.1 结论  57
  5.2 展望  57-59
参考文献  59-63
致谢  63-64
作者简介  64

茶叶中抑制黄曲霉毒素产生的组分及相关特性研究

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