学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

双酚A半抗原的量子点标记及其免疫分析应用

作　者: 王辉
导　师: 王志刚
学　校: 扬州大学
专　业: 环境科学
关键词: 量子点 BPA半抗原 BPA抗体 BPA 荧光光谱
分类号: O657.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 39次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

双酚A (Bisphenol A,BPA)是一种典型的内分泌干扰物,常规的实验室分析耗时繁琐、成本高,难以满足大量样品的现场快速检测需求,亟需发展高效灵敏、方便快捷的检测方法。近年来,量子点作为一种新型的纳米荧光探针,在化学分析、生物组织成像、免疫分析以及微生物的检测方面显示出了广阔的应用前景。与传统的有机荧光探针相比,量子点具有摩尔消光系数大,荧光量子产率高,吸收光谱宽,发射光谱窄而对称,斯托克斯位移大,耐光漂白和化学降解特性好等诸多优点。本文以双酚A为目标分析物,突破量子点标记抗体的传统思路,利用量子点对羧基化的BPA人工半抗原进行标记,研究量子点标记BPA半抗原的荧光特性；同时,考察量子点标记BPA半抗原与BPA抗体特异结合后荧光强度的变化,以及加入目标分析物BPA后由于免疫竞争反应导致的荧光强度随BPA浓度的变化规律,阐明量子点标记BPA半抗原均相免疫反应定量检测BPA的原理。主要的研究结论如下：(1)利用碳二亚胺(EDC)法,成功将氨基量子点偶联到了BPA人工半抗原上。通过激发荧光光谱和发射荧光光谱的分析,确定标记物的最佳激发波长和发射波长分别为231rim和615nnm。(2)量子点标记的BPA半抗原与BPA抗体的特异性结合后,标记物的荧光强度显著增强。当BPA抗体和标记物浓度比为2：1时,荧光强度达到最大,约为初始荧光强度的2倍左右；同时,荧光强度随反应时间变化表现为先增加后降低,反应时间20min时荧光强度达到最大。(3)由于目标分析物BPA与量子点标记的BPA半抗原直接竞争BPA抗体,因此双酚A的存在会抑制BPA抗体特异结合导致的量子点标记BPA半抗原荧光增强。BPA的浓度对数与其对荧光抑制率表现出良好的线性关系线性,线性回归方程为I=21.7781ogC+71.24(I为荧光抑制率,C为BPA浓度对数),R2=0.9999,线性检测范围为0.001ppm～10ppm,抑制中浓度IC2o=7.68ppb, IC50=168.38ppb。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-9
第1章概论  9-24
  1.1 双酚A的研究概况  9-11
    1.1.1 双酚A(Bisphenol A,BPA)的理化性质  9
    1.1.2 双酚A的残留危害  9-10
    1.1.3 双酚A残留的检测方法  10-11
  1.2 量子点的简介及标记技术  11-15
    1.2.1 量子点及其特性  11
    1.2.2 量子点的标记技术  11-15
  1.3 量子点的应用  15-16
    1.3.1 量子点作为荧光探针在化学分析中的应用  15
    1.3.2 在生物组织成像方面的应用  15
    1.3.3 在免疫分析中的应用  15-16
    1.3.4 在微生物检测方面的应用  16
    1.3.5 基于能量转移研究大分子之间的相互作用  16
  1.4. 量子点的制备方法  16-18
    1.4.1 高温有机相合成法  16-17
    1.4.2 水相合成法  17-18
  1.5 量子点的表面修饰  18-21
    1.5.1 通过巯基化合物进行修饰  18-19
    1.5.2 通过硅烷化进行修饰  19
    1.5.3 通过聚合物进行修饰  19-21
    1.5.4 通过静电结合作用进行修饰  21
  1.6 半抗原的简介  21
    1.6.1 半抗原的定义及结构特点  21
  1.7 抗体的简介  21-23
    1.7.1 抗体的定义及结构  22
    1.7.2 抗体的类型  22-23
  1.8 本文的研究目的、研究内容及创新点  23-24
    1.8.1 研究目的  23
    1.8.2 研究内容  23
    1.8.3 创新点  23-24
第2章双酚A半抗原的量子点标记与检验  24-34
  2.1 实验材料及仪器  24-25
  2.2 实验方法  25-27
    2.2.1 载体蛋白(BSA)的模拟偶联实验  25-26
    2.2.2 量子点与BPA半抗原的共价偶联及纯化  26-27
    2.2.3 双酚A半抗原/量子点偶联物的荧光光谱测量  27
  2.3 结果分析与讨论  27-30
    2.3.1 2,4-DB/BSA偶联物的结合比  27-28
    2.3.2 BPA半抗原/BSA偶联物的结合比  28-30
    2.3.3 偶联物结合比的测定结果  30
  2.4 双酚A半抗原/量子点偶联物的荧光特性  30-32
  2.5 本章小结  32-34
第3章基于量子点标记半抗原-直接竞争免疫反应的双酚A检测  34-50
  3.1 实验材料及仪器  34-35
  3.2 实验方法  35-38
    3.2.1 量子点标记BPA半抗原的直接竞争免疫分析方法的建立  35-37
    3.2.2 优化工作条件下QDs-BPA和BPA抗体与BPA的作用  37-38
  3.3 结果分析与讨论  38-49
    3.3.1 量子点标记物加入不同浓度的双酚A抗体的读数  38-42
    3.3.2 量子点标记物与双酚A抗体的最佳工作条件  42-43
    3.3.3 QDs-BPA半抗原与克伦特罗抗体的交叉反应后的读数  43
    3.3.4 反应时间对标记物的影响  43
    3.3.5 标记物荧光稳定性的测定  43-44
    3.3.6 标记物稀释液的选择  44
    3.3.7 优化条件下标记物和抗体与BPA相互作用后的发射荧光光谱  44-45
    3.3.8 优化条件下标记物和抗体与BPA相互作用后的读数  45-48
    3.3.9 双酚A直接竞争法标准曲线  48-49
  3.4 本章小结  49-50
第4章总结与展望  50-51
  4.1 总结  50
  4.2 展望  50-51
参考文献  51-59
致谢  59-61

双酚A半抗原的量子点标记及其免疫分析应用

内容摘要

全文目录

相似论文